[发明专利]荧光造影剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及一种荧光造影剂及其制备方法。

背景技术

近廿年来，肿瘤死亡率急剧上升。在35至59岁的中壮年人群中，肿瘤已列居各类死因之首。有数据显示：我国肿瘤发病率约为200/10万人，每年新发病例约220万人以上，在治疗的患者约600万人以上。肿瘤已成为造成我国最佳劳动力损失、医疗费用上涨的一大原因。尽管已经研究出了一些预防肿瘤的化学药物，但至今仍没有一种有效控制肿瘤的一级预防措施。所以，当前乃至将来相当长一段时间内，早期诊断仍是肿瘤防治的一项基本策略。

肿瘤的诊断主要有血清学标志物（癌胚抗原(CEA)、铁蛋白和单克隆抗体等）检测和分子影像学检测两类方法。其中，应用于肿瘤诊断中分子影像学技术有光学成像技术、CT（电脑断层扫描）成像技术、MRI（磁共振成像）分子成像技术、超声分子影像技术、SPECT技术、PET技术、NIR（近红外荧光成像）技术等。近红外荧光成像虽然具有很好的效果，但是难以实现直接观察肿瘤，因为用于近红外荧光成像中的荧光造影剂需要在暗室中或较暗的光线下，用光激发才能辨别肿瘤细胞。由于近红外荧光成像很难实现直接观察肿瘤给手术操作者带来极大的不便，手术操作者通常需要是在较暗的光线下区分肿瘤组织与正常组织，切除肿瘤组织时存在较大的隐患。

发明内容

基于此，有必要提供一种具有裸眼可视特性的荧光造影剂。

一种荧光造影剂，包括金纳米簇、肿瘤特异性标志物的抗体及考马斯亮蓝，所述金纳米簇与所述肿瘤特异性标志物的抗体通过点击化学方式连接，所述考马斯亮蓝与所述连接有所述肿瘤特异性标志物的抗体的金纳米簇通过静电方式结合。

在其中一个实施例中，所述金纳米簇、所述肿瘤特异性标志物的抗体及所述考马斯亮蓝的摩尔比为1～10:1～100:1～100。

在其中一个实施例中，所述点击化学方式连接为所述金纳米簇表面修饰的叠氮基与所述肿瘤特异性标志物的抗体表面修饰的炔基发生点击化学反应而连接。

在其中一个实施例中，所述金纳米簇的粒径为0.5～2nm。

在其中一个实施例中，所述肿瘤特异性标志物的抗体为乳腺癌的抗HER2蛋白抗体、乳腺癌的抗P53蛋白抗体、乳腺癌的抗p185蛋白抗体、肺癌的CEA单克隆抗体或抗人肺癌单克隆抗体(McAb)N-35。

将上述荧光造影剂用于肿瘤的诊断中，由于肿瘤特异性标志物的抗体对肿瘤细胞具有很强的靶向性，使得肿瘤的诊断结果具有较高的准确性。由于考马斯亮蓝具有肉眼可视化的特性，上述荧光造影剂通过抗原抗体特异性结合到肿瘤细胞上，并洗涤掉没有结合的荧光造影剂，即可通过肉眼得出结果，不要使用仪器设备，即可实现对肿瘤细胞的可视化，同时实现对肿瘤细胞的可见光定位。从而手术操作者可以在正常光线下，且没有额外仪器设备的条件下，肉眼区分肿瘤组织与正常组织，进而准确切除肿瘤组织。由于金纳米簇具有近红外荧光特性，在激发光的作用下发荧光，可以实现对肿瘤细胞的荧光定位。上述荧光造影可以实现对肿瘤细胞的双重共定位，更利于综合分析判断诊断结果，从而有助于及时、正确地做出病理诊断。而且使用上述荧光造影剂进行近红外荧光成像时，不需要加一抗、酶（荧光染料）标二抗及显色剂等。进而使得近红外荧光成像的检测过程具有操作更简便，工作量更少，需要使用的试剂更少等特点，进而能有效减少检测过程的时间以及能有效节约成本。

一种荧光造影剂的制备方法，包括如下步骤：

将浓度为1～100mmol/L的氯金酸溶液与浓度为1～500mg/mL的牛血清白蛋白或人血清白蛋白溶液混合均匀，然后加入浓度为0.1～10mol/L的NaOH溶液，并于摇床中于0～100℃下温育3～100小时，得到金纳米簇，其中，所述NaOH与所述氯金酸的摩尔比为1:1～1:100；

将所述金纳米簇与经NHS预处理的叠氮化试剂按照摩尔比为1:1～1:100的比例混合，得到表面修饰有叠氮基的金纳米簇；

将肿瘤特异性标志物的抗体与炔基化试剂按照摩尔比为1:1～1:100的比例混合均匀并反应0.5小时，反应液经纯化处理后，得到表面修饰有炔基的肿瘤特异性标志物的抗体；

将所述表面修饰有叠氮基的金纳米簇与所述表面修饰有炔基的肿瘤特异性标志物的抗体按照摩尔比为1:1～1:100的比例混合均匀，并孵育0.5小时，得到连接有肿瘤特异性标志物的抗体的金纳米簇；

将考马斯亮蓝与所述连接有肿瘤特异性标志物的抗体的金纳米簇混合，并并孵育0.5小时，得到所述荧光造影剂，其中，所述考马斯亮蓝与所述金纳米簇的摩尔比为100:1～1:1。