[发明专利]用于肿瘤病理诊断的试剂盒及对组织切片进行染色的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及一种用于肿瘤病理诊断的试剂盒及采用用于肿瘤病理诊断的试剂盒对组织切片进行染色的方法。

背景技术

近廿年来，肿瘤死亡率急剧上升。在35至59岁的中壮年人群中，肿瘤已列居各类死因之首。有数据显示：我国肿瘤发病率约为200/10万人，每年新发病例约220万人以上，在治疗的患者约600万人以上。肿瘤已成为造成我国最佳劳动力损失、医疗费用上涨的一大原因。尽管已经研究出了一些预防肿瘤的化学药物，但至今仍没有一种有效控制肿瘤的一级预防措施。所以，当前乃至将来相当长一段时间内，早期诊断仍是肿瘤防治的一项基本策略。

肿瘤特异性标志物检测是临床上检查肿瘤的重要手段之一，主要包括非常成熟的免疫组织化学染色(immunohistoehemicalstaining，IHC)、免疫荧光技术（Immunofluorescence technique，IF）、荧光原位杂交(fluoreseeneeinsitu hybridization，FISH)和显色原位杂交(ehromogenieinsitu hybridiZation，CISH)。IHC和IF检测的是细胞膜上肿瘤特异性标志物的表达情况，而FISH和CISH则是通过检测HERJZ基因扩增的水平来对癌症进行检测。这些方法对离体肿瘤组织及细胞特异性标志物的检测已经得到广泛的认可，在某种程度上较好的满足了乳腺癌等肿瘤的临床诊疗需求。但是，由于这些方法要用到天然的过氧化物酶和有机荧光染料，而天然的过氧化物酶容易变性和失活，且提纯困难、价格昂贵，储藏和使用不便，成本高。有机荧光染料的荧光容易萃灭，导致检测结果易出现假阴性等不准确的诊断结果。

发明内容

基于此，有必要提供一种对肿瘤病理诊断具有较高准确性的用于肿瘤病理诊断的试剂盒。

一种用于肿瘤病理诊断的试剂盒，包括用于肿瘤病理诊断的探针；所述探针包括金纳米簇、肿瘤特异性标志物的抗体及考马斯亮蓝，所述金纳米簇与所述肿瘤特异性标志物的抗体通过点击化学方式连接，所述考马斯亮蓝与所述连接有所述肿瘤特异性标志物的抗体的金纳米簇通过静电方式结合；其中，所述金纳米簇、所述肿瘤特异性标志物的抗体及所述考马斯亮蓝的摩尔比为1～10:1～100:1～100。

在其中一个实施例中，所述点击化学方式连接为所述金纳米簇表面修饰的叠氮基与所述肿瘤特异性标志物的抗体表面修饰的炔基发生点击化学反应而连接。

在其中一个实施例中，所述金纳米簇的粒径为0.5～2nm。

在其中一个实施例中，所述肿瘤特异性标志物的抗体为乳腺癌的抗HER2蛋白抗体、乳腺癌的抗P53蛋白抗体、乳腺癌的抗p185蛋白抗体、肺癌的CEA单克隆抗体或抗人肺癌单克隆抗体(McAb)N-35。

在其中一个实施例中，所述试剂盒中还包括封闭剂、过氧化氢及核染剂。

在其中一个实施例中，所述封闭剂为正常的山羊血清、牛血清白蛋白或牛奶粉。

在其中一个实施例中，所述核染剂为DAPI或Hoechst。

由于金纳米簇具有近红外荧光特性，而且还具有尺寸小、生物相容性好等特性，从而金纳米簇可以作为生物荧光探针。而考马斯亮蓝具有肉眼可视化的特性，可以用于免疫组化检测中。将肿瘤特异性标志物的抗体通过点击化学方式连接到金纳米簇上，而考马斯亮蓝通过静电方式结合到连接有肿瘤特异性标志物的抗体的金纳米簇上，从而得到上述用于肿瘤病理诊断的探针。该探针具有优异的化学和物理性能，粒径小，比表面积大，悬浮稳定性好，对肿瘤具有很强的靶向性。

将上述试剂盒用于肿瘤病理诊断时，由于金纳米簇具有近红外荧光特性，在激发光的作用下发荧光，实现对肿瘤细胞的荧光定位。而由于考马斯亮蓝具有肉眼可视化的特性，上述探针通过抗原抗体特异性结合到肿瘤细胞上，并洗涤掉没有结合的探针，即可通过肉眼得出结果，不要使用仪器设备，即可实现对肿瘤细胞的可见光定位。从而上述试剂盒能实现对肿瘤细胞的双重共定位，不仅增加了单张切片的信息含量，还可初步判断由污点造成的非特异性荧光着色，更利于综合的分析判断实验结果，可增加实验的可信度和说服力，从而有助于及时、正确地做出病理诊断。而且上述试剂盒中不需要包含一抗、酶（荧光染料）标二抗及显色剂等，从而将上述试剂盒用于肿瘤病理诊断时，具有操作更简便，工作量更少等特点，能有效节约成本。更为免疫组化和免疫荧光的相互转化与衔接提供技术和思维平台。

一种使用上述试剂盒对组织切片进行染色的方法，包括如下步骤：