[发明专利]一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法，其特征是该方法包括以下步骤：

步骤1）将待测样本处理，形成单细胞悬液；

步骤2）特征细胞群的抗体染色：

将上述单细胞悬液分别与荧光抗体CD3、CD4、CD69混合；

步骤3）混合液以流式细胞洗液调匀，加入细胞破膜裂解液，混匀冰上孵育30分钟，再用细胞破膜辅液，充分混匀后离心，去上清；

步骤4）新鲜配制脱氧核糖核酸酶液，加入到步骤4）中所得沉淀中，混匀后孵育60分钟，再用细胞破膜辅液，充分混匀后离心，去上清，

步骤5）加入抗体Fc阻断剂，充分作用20分钟；

步骤6）分别加入检测标记调节细胞表位的转录因子（FoxP3）和脱氧核糖核酸复制（BrdU）的抗体； 所述的BrdU、FoxP3分别采用不同荧光标记，分取1.5μl抗体冰上孵育30分钟，再用细胞破膜辅液200μl，洗涤细胞悬液，充分混匀后离心，去上清；

步骤7）流式细胞仪检测：

加入流式细胞洗液500ml，充分混匀后离心，去上清，加入流式细胞洗液，流式细胞仪上机检测。

2. 根据权利要求1所述的一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的染色检测方法，其特征是：所述步骤2）中，单细胞悬液与荧光抗体的稀释比例分别为：单细胞悬液与CD3以体积计算为1：400、单细胞悬液与CD4以体积计算为 1：200、单细胞悬液与CD69以体积计算为1：150, 不同比例稀释后达到体积重量比为1ul：1 ug； 而单细胞悬液与BrdU以体积质量比计算为1.5ul：1 ug、 单细胞悬液与 FoxP3以体积质量比计算为1.5ul：1ug。

3. 根据权利要求1所述的一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法，其特征是：步骤1）中所述单细胞悬液的终浓度为1×10⁷/ml。

4. 根据权利要求1所述的一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法，其特征是：所述步骤2）中，细胞悬液与CD3、CD4、CD69在4℃的条件下结合孵育30分钟，再用PBS洗涤2次。

5. 根据权利要求1所述的用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法，其特征是：所述步骤4）中，所得沉淀用细胞破膜辅液重复洗涤一次，混匀后离心，去上清。

6. 权利要求1至5中任意一项所述的检测方法在用于制备调节性T细胞抑制活性检验试剂盒中的应用。

7. 权利要求1至5中任意一项所述的检测方法在用于制备筛选胰腺早期病变靶标的试剂盒中的应用。