[发明专利]用于检测N-乙酰转移酶2的荧光探针

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测N-乙酰转移酶2（N-acetyltransferase2,NAT2）活性的荧光探针。

背景技术

N-乙酰转移酶2(N-acetyltransferase2,NAT2)是人体重要的代谢酶，主要分布在肝脏，用于催化芳香胺及杂环胺类乙酰化。其对芳香胺类致癌物的活化和灭活及芳胺类药物的代谢起到关键的作用。

遗传和环境等因素共同导致了不同人群的N-乙酰转移酶2活性的巨大差异。目前，高达30%的药物具有芳胺和杂环胺类结构，从而对临床用药提出了巨大的挑战。同时，国内外大量研究证明N-乙酰转移酶2不仅与多种肿瘤有关，而且类风湿性关节炎，糖尿病等多种疾病相关。因此，简单准确的检测N-乙酰转移酶2的活性，对人类的健康至关重要。

目前，检测N-乙酰转移酶2的方法主要有高压液相色谱（HPLC），放射性元素标记和聚合酶链式反应（PCR）等，这些方法主要缺点是耗时长，成本高，操作复杂。

荧光检测简便，灵敏快捷(Chem.Commun.2010,46,7121)。然而该荧光探针波长为580nm，研究中发现相对于生物应用波长较短，具有较强的背景荧光。因此，开发吸收和发射波长都在近红外区域的荧光探针用于检测N-乙酰转移酶2的活性对于临床疾病早期诊断，个性化给药和新药研发过程中药代动力学的研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的发明人经大量的母体化合物的筛选，并对筛选获得的母体化合物进行适当的化学修饰后，获得一类化合物。该类化合物的吸收和发射波长都在近红外区域，且基本没有背景荧光干扰，可用作检测NAT2活性的荧光探针。

本发明的一个目的在于，提供一种用于检测NAT2活性的荧光探针。

本发明所述的荧光探针为式Ⅰ所示化合物，或其在药学上可接受的盐：

式Ⅰ中，R₁和R₂分别独立选自：亲水基团或亲水阴离子基团中一种；R₃和R₄分别独立选自：C₁～C₄直链或支链的烷基中一种；R₅～R₉分别独立选自：氢（H）、C₁～C₄直链或支链的烷基、C₁～C₄直链或支链的烷氧基或氨基（-NH₂）中一种，且R₅～R₉中至少有一个为-NH₂；X为O、S或NH。

本发明另一个目的在于，提供一种制备式Ⅰ所示化合物的方法。

所述方法的主要步骤是：在有惰性气体存在及室温条件下，由式Ⅱ所示化合物与式Ⅲ所示化合物于无水有机溶剂中反应得到目标化合物（式Ⅰ所示化合物）：

式Ⅱ和Ⅲ中，R₁～R₉及X的定义与前文所述相同，Y为Cl或Br。

其中，式Ⅱ所示化合物是已知物，可采用现有技术制备。

附图说明

图1为探针CYP1及其代谢产物N-CYP1在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的吸收和发射光谱；

其中，A)为探针CYP1及其代谢产物N-CYP1在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的吸收光谱；

B)为探针CYP1及其代谢产物N-CYP1在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的发射光谱。

图2为探针CYP2及其代谢产物N-CYP2在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的吸收和发射光谱；

其中，A)为探针CYP2及其代谢产物N-CYP2在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的吸收光谱；

B)为探针CYP2及其代谢产物N-CYP2在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的发射光谱。

图3为探针CYP3及其代谢产物N-CYP3在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的吸收和发射光谱；

其中，A)为探针CYP3及其代谢产物N-CYP3在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的吸收光谱；

B)为探针CYP3及其代谢产物N-CYP3在pH=7.5的Tris-HCl缓冲溶液中(含1%DMSO)的发射光谱。