[发明专利]一种快速分离纯化基因组DNA的方法及试剂盒

权利要求书

1. 一种快速分离纯化基因组DNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、磁性微粒、清洗液和洗脱液，其特征在于所述试剂盒由如下试剂组成：

a  所述裂解液包括裂解液Ⅰ和裂解液Ⅱ；所述裂解液Ⅰ包括10-70mM三羟甲基氨基甲烷、0.1-50mM螯合离子、50-500mM钠盐、0.2-5%阴性离子去污剂、0.5-10%中性去污剂和0.1-0.5mg/ml的蛋白酶K，所述裂解液Ⅰ的pH值7-9；所述裂解液Ⅱ包括30-100mM三羟甲基氨基甲烷、0.2-5%阴性离子去污剂、2-6M胍盐和10-40%的醇，所述裂解液Ⅱ的pH值6-7.5；

b  所述磁性微粒包括磁性微粒的悬浮液和磁性微粒，所述磁性微粒悬浮液包括5-50mM三羟甲基氨基甲烷及50-100%乙醇或异丙醇两种中的一种；所述磁性微粒为纳米级或微米级硅包被的磁性微球，每毫升的磁性悬浮液中的磁性微粒为20-100mg；

c  所述清洗液包括清洗液Ⅰ和清洗液Ⅱ；所述清洗液Ⅰ包括0-5M胍盐、0-50%的醇、0-10mM三羟甲基氨基甲烷、0-200mM醋酸钾和0-5%中性去污剂，所述清洗液Ⅰ的pH值6-7；所述清洗液Ⅱ为10-80%的醇；

d  所述洗脱液为10-20mM三羟甲基氨基甲烷，所述洗脱液的pH值7.5-9。

2.根据权利要求1所述的一种快速分离纯化基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述试剂盒由如下试剂组成：

a 所述裂解液Ⅰ包括20mM三羟甲基氨基甲烷、10mM乙二胺四乙酸二钠、100mM氯化钠、2%十二烷基硫酸钠、4%Triton X-100和0.2mg/ml的蛋白酶K，所述裂解液Ⅰ的pH值8；

b 所述裂解液Ⅱ包括50mM三羟甲基氨基甲烷、0.2% N-十二烷基肌氨酸钠、5M异硫氰酸胍和20%的乙醇，所述裂解液Ⅱ的pH值6.7；

c 所述磁性微粒包括10mM三羟甲基氨基甲烷和80%乙醇，每毫升的磁性悬浮液中的磁性微粒为50mg；

d 所述清洗液Ⅰ包括4M异硫氰酸胍和30%的醇；或者200mM醋酸钾、2%Triton X-100和10mM三羟甲基氨基甲烷，所述清洗液Ⅰ的pH值6.7；

e 所述清洗液Ⅱ为75%的乙醇；

f 所述洗脱液为10mM三羟甲基氨基甲烷，所述洗脱液pH值8.5。

3.一种快速分离纯化基因组DNA的方法，利用权利要求1或2所述的一种快速分离纯化基因组DNA的试剂盒，经过裂解液室温裂解消化、磁性微粒吸附、清洗液清洗及洗脱液室温洗脱即得到高纯度基因组DNA，其特征在于方法如下：

1)  取两倍体积的裂解液Ⅰ加入样本中，混匀，室温消化10min；

2)  取4倍样本体积的裂解液Ⅱ加入到上述消化的样本中，混匀，室温消化5min；

3)  取10-30ul磁性微粒加入样本中，混匀，磁吸，弃上清；

4)  加入5-50倍样本量体积的清洗液Ⅰ，混合，磁性分离，弃上清；

5) 加入5-50倍样本量体积的清洗液Ⅱ，混合，磁性分离，弃上清；

6)  室温晾干，加入20-200ul洗脱液室温洗脱溶解DNA。

4.根据权利要求3所述的一种快速分离纯化基因组DNA的方法，其特征在于所述裂解消化和洗脱都是在室温条件下分离纯化DNA。

5.权利要求1或2所述的一种快速分离纯化基因组DNA的试剂盒在分离纯化基因组DNA中的用途。