[发明专利]一种促进骨细胞生长的海藻类药物衍生物的制备和应用

说明书

技术领域

本发明属于医学临床用药，具体说是涉及一种适用于骨折、骨不连、股骨头坏死、骨质疏松的治疗与预防的药物。

背景技术

海带(Laminaria japonica aresch)又名昆布，为海带科植物。海带又称“江白菜”，是一种褐藻，藻体褐色，一般长2.4m，最长达7m。海带质柔味美，经济价值较高，含有丰富的营养成分和可贵的活性物质，它不但是家常食品，同时也具有较高的医疗价值。常吃海带能补血润脾，医治或防止甲状腺肿大，降低血液中的胆固醇，防止血管硬化、癞皮病及肝脏疾病。海带还具有化痰、利水泄热的功效。从海带中提取的甘露醇，是治疗急性肾功能衰竭、脑炎、急性青光眼等病的急救药。所以，海带被人们称为“健康食品”和“长寿菜”。海带是大自然馈赠给人类的理想健康食品。

海带中含有海带多糖(Laminarin)，至今已发现三种多糖：海藻酸钠、岩藻糖胶、褐藻淀粉，酸性聚糖类物质，岩半乳多糖硫酸酯，大叶藻素、半乳糖醛酸、海带纤维，昆布氨酸，牛磺酸，双歧因子等多种活性成分，含海藻酸钠243％，粗蛋白5.97％～8.20％，甘露醇11.13％～67％，钾4.36％，碘0.34％。

发明内容

本发明的目的正是提供一种制备方法简单，原料来源广泛的治疗和预防骨折的药物。本发明的药物有成本低廉，原料易得，治疗效果显著的优点。

本发明的目的可通过下述技术措施来实现：

本发明的治疗和预防骨折的药物是由海带、昆布等富含海藻酸的藻类海洋植物、以及氢氧化钠、一氯乙酸制备而成。其制备方法如下：

1、羧甲基化制备：取海带100g，干燥后粉碎成粉状，按每100g海带加入200ml5％浓度的氢氧化钠混合均匀，35℃下搅拌0.5h；然后按每100g海带干粉加入一氯乙酸15g、氢氧化钠10g的混合物，在70-80℃条件下搅拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到海藻类药物衍生物生成物，生成物干燥。

2、取海带100g，干燥后粉碎成粉状，按每100g海带加入200ml5％浓度的氢氧化钠混合均匀，35℃下搅拌0.5h；然后按每100g海带加入一氯乙酸15g、氢氧化钠10g的混合物，在50℃条件下超声功率580W，频率20kHz。处理时间30min，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到海藻类药物衍生物生成物，生成物干燥。

为了进一步的验证本发明成品制剂的疗效，我们将上述具体制备方法1-2中制备的药物进行了相应的动物试验，其具体试验数据如下：

试剂：骨形态发生蛋白-2(BMP-2)抗体购于北京博奥森生物技术有限公司。

动物：昆明小鼠30只，体重18-22g，雄性。

方法：把30只体重20～30g，1～2月龄小白鼠股骨制成骨折动物模型，分成治疗组A和对照组B两组，每组15只。A组每只每天海藻类药物衍生物0.3g灌胃，B组每只每天0.3g葡萄糖灌胃，每组小鼠分别于7/14/28d各处死5只。取小白鼠股骨制病理切片。标本经10％甲醛固定后脱钙，免疫组化染色。结果两组差异显著，A组3-4周即可形成连续性骨痂，临床愈合，最短14天即可形成连续骨痂。

结果：BMP-2蛋白的免疫阳性产物表达于骨基质内和骨母细胞胞质内，呈棕黄色。采用半定量法判断BMP-2蛋白的表达情况：选10个高倍视野，显色的阳性反应细胞数＜25％为+，25～50％为++，＞75％为+++，无明显阳性反应细胞为-。计数资料的统计学分析采用卡方检验。检验标准α＝0.05。BMP-2蛋白的表达情况，结果显示治疗组的BMP-2值治疗后比空白对照组在术后7d，15d，21d有显著提高，两组间比较也有显著性差异。(表1)

表1术后7d，15d，21d 3组BMP-2蛋白的表达情况比较(n＝15)

附图说明：

图1术后7d治疗组BMP-2蛋白表达高于空白组(p＜0.01)，结果具有统计学意义。术后7d治疗组BMP-2蛋白的表达情况(sp，400×)。治疗组成骨细胞、骨细胞及部分间充质细胞，阳性着色深。

图2术后7d对照组BMP-2蛋白表达低于治疗组(p＜0.01)，结果具有统计学意义。7d空白组BMP-2蛋白的表达情况(sp，400×)。股骨中端BMP-2蛋白表达平均光密度较对照组明显降低。

图3术后14d治疗组BMP-2蛋白表达高于空白组(p＜0.01)，结果具有统计学意义。(sp，400×)。治疗组成骨细胞、骨细胞及部分间充质细胞，广泛出现BMP-2阳性着色。