[发明专利]一种链霉菌和以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物和新型医药农药领域，具体为一种链霉菌和以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物及其制备和应用。 

背景技术

海洋微生物已成为新型医药和农药的重要来源，更是新型药物创制的新的增长点。当前，海洋微生物因具有极其庞大的类群和丰富的代谢产物，越来越受到各国科学家的重视，尤其是深海微生物，因其独特的海洋环境和特殊的微生物类群，新的活性化合物被不断发现。这将为新发生的感染性疾病、耐药病菌的治疗和高效、安全、低毒的兽药和农药的开发提供良好的候选药物。 

Spiroteteronates是一类具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗疟疾等广泛生物活性的天然抗生素。目前已发现的spiroteteronates类化合物有kijanimicin,tetrocarcins,chlorothricin,decatromicins，saccharocarcins,antlermicins,versipelostatins,arisostatins,quartromicins，chrolactomycin和lobophorins。其独特的化学结构和生物活性不断吸引药物学家的关注。 

发明内容

本发明目的在于提供一种链霉菌和以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物及其制备和应用。 

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种链霉菌，链霉菌分类学命名为链霉菌12A35Streptomyces sp.12A35，于2012年12月18日保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏编号：CCTCC M2012529，保藏单位地址为中国.武汉.武汉大学。 

以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物，如(I)所示的lobophorinsG和H。 

以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物的制备方法， 

1)将链霉菌Streptomyces sp.12A35接种于含人工海盐的PSA液体培养基中发酵4-10天；将发酵液和菌丝体固液分离，其中发酵液用大孔吸附树脂吸附，树脂与发酵液质量体积比为之比为1：10-30；吸附完成后，先用蒸馏水洗涤树脂，再用乙醇解吸，回收乙醇溶剂后得spiroteternate的粗提物A；菌丝体经丙酮浸提3次，将浸泡液减压浓缩为浸膏使用甲醇精制得到spiroteternate的粗提物B； 

2)将spiroteternate的粗提物A和B合并，采用快速硅胶柱色谱法分离，按照二氯甲烷：甲醇(v/v)比为10:0-0:10梯度洗脱，收集体积比为9:1-7:3的二氯甲烷-甲醇(v/v)的洗脱组分，即得含spiroteternate类化合物的色谱流分； 

3)上述所得色谱流分再采用反相中压色谱进行纯化，按照甲醇：水(v/v)比为1:9-10:0梯度洗脱，收集体积百分比为80%-95%的甲醇水溶液洗脱液，将收集的组分再以反相HPLC进行纯化，流动相为含0.05%TFA的体积百分比90%的甲醇水溶液等度洗脱，流速为2-5ml/min;收集保留时间分别为7-9min、9-11min、11-15min、15-17min、16-20min的色谱峰即得得到O-β-kijanosyl-(1→17)-kijanolide（4d）、H（4e）、lobophorins B（4a）、G（4b）和F（4c）。 

将链霉菌Streptomyces sp.12A35经海水高氏一号培养基活化后接种于含人工海盐的PSA液体培养基中，温度20-37℃，转速100-300rpm，发酵培养4-10d。 

所述含人工海盐的PSA液体培养基为，10.0～30.0g蔗糖，100g～350g土豆浸出液，20.0～40.0g人工海盐，用蒸馏水配平至1L，pH5.0～8.0。 

以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物的应用，所述化合物可作为制备成医用、兽用或农用非治疗目的的抗菌剂。所述化合物可作为抗金黄色葡萄球菌或地衣芽孢杆菌的抑菌剂。