[发明专利]牛A型口蹄疫多表位疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛A型口蹄疫疫苗及其制备方法和应用，本发明尤其涉及一种牛A型口蹄疫多表位重组疫苗及其制备方法和应用，属于兽用疫苗研究领域。

背景技术

口蹄疫作为主要经济畜种猪、牛和羊的重大动物疫病不仅严重威胁畜牧业的健康发展，而且涉及动物源性食品安全以及其外贸出口。一旦发生疫情损失惨重，政治影响恶劣。灭活疫苗在防控FMD疫情中发挥着十分重要的作用，但由于生产此类疫苗需要建设防止病原体逃逸的高级别生物安全生产车间，区分疫苗免疫和自然感染动物（DIVA）。更为严重的是病毒灭活不完全有引起疫苗毒株流行的危险。为此，1991年后欧盟成员国停止使用灭活疫苗，美国也禁止在其本国生产和使用灭活疫苗。

采用分子生物学，蛋白组学以及反向疫苗学等相关技术研发安全高效的FMD新型疫苗已经成为疫苗研制的热点课题。目前，已经有我国上海复旦大学郑赵鑫教授研制的猪O型口蹄疫病毒重组疫苗申获了专利，并获得农业部颁布的―一类新兽药证书‖，但该产品至今没有实现商品化。我们实验室通过新技术研制的牛和羊Asia1型口蹄疫重组多表位疫苗经动物免疫效力试验证实具有良好的免疫原性，并申获了相关技术的专利，其发明名称分别为“牛口蹄疫病毒Asia1型重组多表位疫苗及其制备方法”（专利号：ZL200910259363.6）和“羊口蹄疫病毒Asia1型多表位疫苗及其制备方法”（专利号：ZL200910224025.9）。

如今，利用反向疫苗学技术研制新型疫苗已经成为未来疫苗发展的趋势。传统灭活疫苗生物安全的不确定性加速了研究口蹄疫新型疫苗的进程。值得一提是，近年来通过增加T细胞表位，并辅以宿主自身免疫分子为载体蛋白以加强抗原递呈能力、增加分子量、促进B细胞成熟分化等手段和策略明显改善了疫苗的免疫原性。同时解决了多表位广谱抗原基因的多次串联后表达效率低下等技术瓶颈，不仅能获得大量高纯度靶标蛋白，而且也能保证所表达靶标蛋白的免疫原性，这为研制口蹄疫广谱多表位疫苗，防止由于抗原谱单一导致免疫失败提供了很好的技术支持和理论依据。

本发明采用分子生物学技术以及先进的设计理念，针对我国牛A型口蹄疫病毒毒株的主要抗原表位序列，研制牛A型口蹄疫广谱多表位疫苗，以期从根本上解决目前表位疫苗免疫效力低下和抗原谱单一的缺陷，该研究成果对控制和净化我国牛A型口蹄疫具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种牛A型口蹄疫多表位重组抗原，该抗原涵盖了曾经在我国流行的牛A型口蹄疫病毒的代表性毒株的优势抗原表位序列；

本发明的目的之二在于提供所述重组抗原在制备牛A型口蹄疫疫苗中的应用；

本发明的目的之三在于提供一种牛A型口蹄疫多表位疫苗，其含有本发明所述的重组抗原。

为了达到所述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明的一种牛A型口蹄疫多表位重组抗原，其特征在于所述的重组抗原是将曾经在我国流行的牛A型口蹄疫病毒的代表性毒株的优势抗原表位进行串联后，与牛IgG重链恒定区偶联后构建得到，所述的重组抗原含有以下（a）或（b）所示的氨基酸序列：

（a）SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列；或

（b）将SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列通过一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或插入而获得的仍具有抗原表位功能的蛋白衍生物。

在本发明的一个具体实施例中，所述的重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。

编码所述的重组抗原的核苷酸序列，其特征在于具有以下（a）、（b）或（c）所示的核苷酸序列：

（a）SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列；或

（b）编码SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的核苷酸序列；或

（c）编码具有多表位抗原功能的蛋白衍生物的核苷酸序列，该蛋白衍生物通过将SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的一个或多个氨基酸残基替换、缺失或插入而获得。

在本发明的一个具体实施例中，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

含有本发明所述的核苷酸序列的重组表达载体以及含有该载体的宿主细胞也在本发明所保护的范围之内。

进一步的，本发明还提出了本发明所述的多表位重组抗原在制备预防牛A型口蹄疫疫苗中的应用。及

所述的核苷酸序列在制备预防牛A型口蹄疫疫苗中的应用。