[发明专利]一种发酵法制取埃博霉素B的方法

权利要求书

1.一种发酵法制取埃博霉素B的方法，主要包括以下步骤：

纤维堆囊菌ABM113(Polyangium cellulosum)：保藏编号：CGMCC No.6418；

1)摇瓶发酵：用海藻酸钠和纤维堆囊菌ABM113制得固定化菌种，经逐级放大培养后转种发酵培养基，发酵培养基中加入吸附树脂，灭菌，在一定pH值、接种量、消泡剂、培养基添加方式、添加混合元素的条件下发酵；

2)提取纯化：发酵结束后，乙酸乙酯解吸，解吸液蒸去乙酸乙酯，加入甲醇适量复溶，获得粗品，粗品经Sephadex LH-20柱层析，收集6.5min后的洗脱液，经Sephadex LH-20分离后的馏分，通过C18反相色谱柱进一步纯化，收集60～80min后的洗脱液，旋转蒸发至干，得到白色结晶状埃博霉素B。

2.根据权利要求1所述的发酵法制取埃博霉素B的方法，其特征在于：所述1)摇瓶发酵步骤中，用海藻酸钠和纤维堆囊菌ABM113制得固定化菌种的具体过程为：取10～20mL灭菌的2％～4％海藻酸钠和培养了2～5天的纤维堆囊菌ABM1132～8mL进行充分混合，用吸管吸取混合液慢慢的滴加到3％的CaCl₂，所述3％的CaCl₂的温度为20℃，静置2个小时，之后用灭菌水清洗，制得直径3mm大的球状颗粒，接入种子培养基中，培养2～5天后，弃去培养液，无菌水反复冲洗三次，得到固定化载体。

3.根据权利要求1所述的发酵法制取埃博霉素B的方法，其特征在于：所述发酵培养基的成分为：脱脂奶粉8～12g/L，酵母粉4～8g/L，马铃薯淀粉20～25g/L，CaCl₂·2H₂O 0.4～0.6g/L，MgSO₄·7H₂O0.4～0.6g/L，Fe-EDTA5～10mg/L。

4.根据权利要求1所述的发酵法制取埃博霉素B的方法，其特征在于：所述发酵培养基中加入的吸附树脂为：NK型弱极性大孔吸附树脂、HLD-16中性大孔树脂或XAD-16树脂。

5.根据权利要求1所述的发酵法制取埃博霉素B的方法，其特征在于：所述步骤1)摇瓶发酵中所述消泡剂为：0.6～21.2‰V/VAntifoam204(Sigma)、Antifoam B(Sigma)或1030F。

6.根据权利要求1所述的发酵法制取埃博霉素B的方法，其特征在于：所述步骤1)摇瓶发酵中所述培养基添加方式为：一次性添加、分两次添加或分三次添加；

其中，所述分两次添加具体为：起始添加一半发酵培养基，四天后添加另一半发酵培养基；

所述分三次添加具体为：起始添加一半发酵培养基，三天后添加1/4发酵培养基，六天后添加1/4发酵培养基。

7.根据权利要求1所述的发酵法制取埃博霉素B的方法，其特征在于：所述步骤1)摇瓶发酵中添加混合元素为：不添加或添加混合元素FeCl₃、ZnCl₂、MnCl₂·4H₂O、CuCl₂·2H₂O各0.5～1.2mg/L。