[发明专利]蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用。

背景技术

肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhage E．coli，EHEC）是毒力最强、致病性也最强的大肠杆菌，受到广泛的关注。EHEC感染可使人患腹泻、出血性结肠炎（HC），还可引发溶血性尿毒综合症（HUS）及血栓性血小板减少紫癜（TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡，致死率达5%～10%。2011年4月，德国暴发了肠出血性大肠杆菌O104：H4感染和溶血性尿毒综合征（HUS）疫情，蔓延到欧洲和北美洲的16个国家。同年四、五月间，日本富山地区暴发了新感染疫情，血清型为O111，某些病例在引起HUS之后，出现了神经症状，并发弥散型血管内凝血和脑病。在EHEC中，致病性强、危害大的还有O157：H7。自1975年被首次分离、1982年被确认为致病菌以来的20多年中，世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。1999年在我国江苏、安徽两省有过大规模暴发流行，患者超过2万例，死亡177例。EHEC感染已经成为欧美国家儿童肾衰的首位病因，对人们的健康构成了巨大威胁。另外，作为一种重要的人兽共患病病原体，EHEC病原菌可长期驻留于牛、羊、猪、鸡等家畜家禽的肠道中，造成动物的腹泻，并污染畜禽的肉奶蛋制品以及水源和农作物等，给农牧业生产造成巨大的损失。因此，EHEC感染已经成为全球性的公共卫生问题。

目前，临床针对EHEC感染主要采取对症治疗，因为抗生素治疗具有加剧病情的危险性而被谨慎使用，没有可以使用的疫苗和特异治疗药物。如果能发现和获得病原菌的核心抗原或优势保护性抗原，就可以进一步发展新型的疫苗、治疗药物和诊断试剂。

目前，由多抗原组分制备多价重组蛋白疫苗是EHEC疫苗发展的热点，备受关注。其研制成功的关键在于选择强免疫原性的候选抗原，而已经被证实具有良好免疫原性和一定保护力的有Intimin，Tir，EspB，EspA，Hly和外毒素Stxs抗原组分等。不同抗原组分的组合尝试也一直在进行：PotterAA等研制以Tir和EspA为免疫原制备的防止牛感染EHEC O157：H7的新型疫苗，试验显示有效率达59%。易勇等利用基因重组技术分别构建了Stx2B-IntiminC300融合蛋白疫苗，以致死剂量的EHEC O157：H7菌超声破菌液对免疫小鼠进行攻毒实验，免疫保护作用为65%，后又相继构建了Intimin、EspA及Hly等多价亚单位融合基因工程疫苗，在小鼠定植和致死动物模型中的实验证明同时具有抗定植和抗毒素的作用。本发明人也曾先后制备Intimin、Stx1B、Stx2B、Stx2B-Stx1B、Stx2B-Stx1B-Intimin以及SAmB等单一组分和多组分抗原，还新发现了Paa抗原，并证实均有不同程度的抗EHEC O157：H7感染的能力。

尽管如此，由于EHEC病原菌致病岛涉及基因复杂多样，很多毒力因子的功能尚未阐明。虽然Genbank中已公开了大量的EHEC病原菌的全基因组，但是基因组的功能注释并不完全，大量的编码蛋白的功能没有得到确认，特别是可用于诊断和防治药物开发的功能蛋白还没有全面被发现，还有很大空间去鉴定发现新的具有临床应用价值的功能分子。

发明内容

本发明的第一个目的是提供如下A-D中任一所示的物质的新用途。

本发明提供的如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用：

1）预防和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；

2）降低病原菌EHEC对肠道感染损伤；

A、Z0390蛋白、B、含有Z0390蛋白的蛋白组合物、C、含有Z0390蛋白的融合蛋白、D、含有Z0390蛋白的融合蛋白的蛋白组合物；

所述Z0390蛋白为如下（1）-（3）中任一所示的蛋白：

（1）序列表中的序列2所示的氨基酸组成的蛋白质；

（2）序列2自N’末端第1-370位氨基酸组成的蛋白质；

（3）将1）或2）所示蛋白的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。

上述含有Z0390蛋白的融合的蛋白为由Z0390蛋白和其他蛋白形成的融合蛋白。

上述应用中，所述含有Z0390蛋白的蛋白组合物为由所述Z0390蛋白和其他蛋白组成的组合物，