[发明专利]抗体纯化

权利要求书

1.一种用以从包含抗体和至少一种宿主细胞蛋白质(HCP)的混合物生产HCP降低的抗体制品的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将所述混合物施加到在平衡缓冲液中的第一离子交换树脂，其中施加量大于30克抗体/升树脂；

(b)以多个洗涤步骤从所述树脂洗涤HCP；和

(c)用洗脱缓冲液从所述树脂洗脱所述抗体形成第一洗脱物，由此获得所述HCP降低的抗体制品。

2.权利要求1的方法，其中施加量约为35-70克抗体/升树脂。

3.权利要求1的方法，其中施加量约为70克抗体/升树脂。

4.权利要求1的方法，其中包含抗体和至少一种HCP的所述混合物在被施加到第一离子交换树脂前不被施以A蛋白捕捉。

5.权利要求1的方法，其中所述多个洗涤步骤包括至少第一次洗涤和第二次洗涤，其中从第一次洗涤到第二次洗涤电导率有增加。

6.权利要求5的方法，其中第一次洗涤是用平衡缓冲液进行，第二次洗涤是用洗脱缓冲液和水的混合物进行。

7.权利要求6的方法，其中洗脱缓冲液和水的混合物包含约40-50％洗脱缓冲液和约50-60％水。

8.权利要求7的方法，其中洗脱缓冲液和水的混合物包含约45％洗脱缓冲液和约55％水。

9.权利要求8的方法，其中洗脱缓冲液包含20mM磷酸钠和150mM氯化钠。

10.权利要求1的方法，所述方法在pH7下进行。

11.权利要求1的方法，所述方法在约pH5至约pH7的pH下进行。

12.权利要求1的方法，所述方法在pH5下进行。

13.权利要求1的方法，其中第一离子交换树脂是阳离子交换树脂。

14.权利要求13的方法，其中将所述阳离子交换树脂形成柱子，将包含抗体和至少一种HCP的混合物施加到所述柱子。

15.权利要求14的方法，其中所述阳离子交换树脂包含与磺酸基连接的基于合成的甲基丙烯酸酯的聚合物树脂。

16.权利要求1的方法，所述方法还包括将第一洗脱物进行病毒灭活步骤。

17.权利要求16的方法，其中病毒灭活是通过pH病毒灭活来实现，以形成病毒灭活制品。

18.权利要求17的方法，其中将病毒灭活制品施加到第二离子交换树脂，其中在将病毒灭活制品施加到第二离子交换树脂前，将病毒灭活制品的pH和电导率调整到与第二离子交换树脂的pH和电导率基本相似。

19.权利要求18的方法，其中第二离子交换树脂的pH在约pH7.7至约pH8.3的范围，病毒灭活制品的pH调整到约pH7.7至约pH8.3的范围。

20.权利要求19的方法，其中第二离子交换树脂的pH为约pH8.0，病毒灭活制品的pH调整到约pH8.0。

21.权利要求18的方法，其中第二离子交换树脂的电导率在约3.5mS/cm至约5.2mS/cm的范围，病毒灭活制品的电导率调整到约3.5mS/cm至约5.2mS/cm的范围。

22.权利要求21的方法，其中第二离子交换树脂的电导率为约5.0mS/cm，病毒灭活制品的电导率调整到约5.0mS/cm。

23.权利要求18的方法，其中第二离子交换树脂是阴离子交换树脂。

24.权利要求23的方法，其中所述阴离子交换树脂是Q琼脂糖凝胶树脂。

25.权利要求18的方法，其中将第二离子交换树脂形成柱子，将病毒灭活制品施加到所述柱子，由此获得第一流通物。

26.权利要求25的方法，其中将第一流通物施加到疏水相互作用柱，由此获得第二洗脱物。

27.权利要求26的方法，其中所述疏水相互作用柱是苯基琼脂糖凝胶柱。

28.权利要求26的方法，其中施加到所述疏水相互作用柱的第一流通物包含约20至约40克抗体/升疏水相互作用柱材料。