[发明专利]一种含有TGF-β1 siRNA的细胞微泡的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种含有TGF-β1siRNA的细胞微泡的应用。

背景技术

转化生长因子β（transforming growth factor beta，TGF-β）属于一类多功能多肽性的生长因子超家族。该家族主要包括转化生长因子β（TGF-β）、骨形成蛋白（bone morphology protein，BMP）、生长转化因子（growth and differentiation factors，GDF）、缪氏抑制因子（Mullerian inhibitory factor，MIF）和激活素（Activins）/抑制素（inhibins）等，其中在哺乳动物细胞中，TGF-β主要包括TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3三种亚型，其中TGF-β1与肿瘤的发生发展密切相关。其主要表现为以下几个阶段：（1）在肿瘤发生的初期，由于TGF-β可使细胞停滞在G1期或延长G1期，进而可作为肿瘤抑制物抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞的分化和凋亡；（2）在肿瘤发展的中期阶段，此时肿瘤细胞及肿瘤微环境中的基质细胞都可自分泌产生TGF-β，且TGF-β对肿瘤细胞的增殖抑制作用降低或消失，进而导致肿瘤细胞急剧分裂增殖；（3）到了肿瘤发生的晚期，此时微环境中的TGF-β含量增加，并且它作为一促进肿瘤的细胞因子发挥功能，即：可通过刺激血管生成、促进癌细胞扩散、逃避免疫细胞的监视及促进肌成纤维细胞的形成，进而合成细胞外基质等促进肿瘤细胞的生长、浸润和转移。

此外，除了TGF-β外，TGF-β信号通路中的受体及信号通路下游的smad蛋白复合物也都已成为近年来研究肿瘤的热点对象。鉴于TGF-β及其信号通路中的成员在致癌过程中的作用，目前它们已被作为有力的治疗靶点，用于治疗肿瘤。如：针对TβR的可溶性蛋白受体抑制剂、针对三种TGF-β单体的抗体和siRNA抑制剂、针对TβRⅠ激酶的小分子抑制剂及针对TGF-β2的疫苗等。

上述的抑制剂虽在治疗肿瘤方面取得了突破性的进展，但运用TGF-βsiRNA作为基因类药物在生物体内进行肿瘤治疗时，仍存在以下缺点，如：容易被核酸酶降解、稳定性较差、细胞内转染效率低、安全性不明确等。因而，运用TGF-β及其通路中的信号分子的寡聚核苷酸治疗肿瘤的方法还有待于进一步改进。

细胞微泡（Microvesicles（MVs））是一类在正常和病理状态下，机体细胞都可分泌的一种小囊泡，其直径约为30～1000nm。该类微小囊泡大都是具双层膜结构的球状小泡，且除了在其膜表面有蛋白分布外，在球状小泡的内部也含有一些蛋白、mRNA、miRNA和细胞因子等物质。目前发现，microvesicles不仅可与其周围的靶细胞相互作用，也可通过脉管系统作用于较远的组织细胞。当MVs与其靶细胞相互作用发生融合后，便可将其包裹转运的诸如细胞因子、趋化因子、酶、核酸、生长因子和信号分子等物质释放到受体细胞内部。这些生物分子在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中发挥作用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一种含有TGF-β1siRNA的细胞微泡的应用。

本发明的另一目的是提供一种抑制肿瘤的药物。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

包裹TGF-β1siRNA的细胞微泡在制备抑制肿瘤的药物中的应用。

其中，所述的肿瘤为TGF-β表达较高的肿瘤。

所述的TGF-β1siRNA优选反义链序列为SEQ ID NO.1的TGF-β1siRNA。

所述的细胞微泡来源于细胞或组织的分泌，优选来源于L929细胞的分泌。

一种抑制肿瘤的药物，所述的药物为包裹TGF-β1siRNA的细胞微泡。

所述的肿瘤为TGF-β表达较高的肿瘤。

所述的TGF-β1siRNA的反义链序列优选SEQ ID NO.1。

所述的细胞微泡来源于细胞或组织的分泌，优选来源于L929细胞的分泌。

本发明中所述的包裹TGF-β1siRNA的细胞微泡（microvesicles）可通过将TGF-β1siRNA利用本领域常规手段转染细胞，并提取细胞培液中的microvesicles所得。microvesicles的提取也是本领域的常规技术手段。

有益效果：