[发明专利]一种酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及乳源ACE抑制肽制备技术领域，特别涉及一种酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法。

背景技术

随着经济的发展和人们生活水平的逐渐提高，饮食中脂肪和热量的比重也有了显著的提高，随着机械化、自动化、信息化程度的提高，导致了体力活动的减少，这些都引起了我国心脑血管疾病的发病率快速上升。心血管疾病以冠心病为主，冠心病又称冠状动脉硬化性心脏病，而高血压是动脉粥样硬化的重要危险因素，且血压水平与心血管发病危险呈正相关。2010年中国高血压防治指南指出，我国人群高血压患病率仍呈增长态势，每10个成人中就有2人患高血压；估计目前全国高血压患者至少2亿。

高血压是指在未使用降压药物的情况下，收缩压≥140mmHg和（或）舒张压≥90mmHg。目前，常用于抗高血压药物治疗的有6种主要的降压药物，它们分别是利尿剂、α-受体拮抗剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂和α-肾上腺素受体阻滞剂。这些降血压药物虽然有显著的降压效果，但却存在一定的毒副作用，如引起咳嗽、过敏性血管水肿及肾功能不全加重等。有研究报道将食物蛋白质进行水解后形成的小分子多肽，即血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽，具有显著的降血压作用，将它与普通降压药物进行比较，发现无毒副作用，并且对正常的血压无影响。ACE抑制肽一般以无活性的形式存在于蛋白质序列中，但当蛋白质通过热、酸碱的降解、酶制剂的水解或微生物的发酵等，无活性的蛋白质中可以释放出具有降压作用的ACE抑制肽。ACE的制备方法主要有5种：化学降解法、酶解法、微生物发酵法、化学合成法和基因工程法，现在研究最多的是酶解法和微生物发酵法。相对于微生物发酵法，酶法反应快速，制备ACE抑制肽抑制活性高，且原料广泛，主要有乳类蛋白、植物类蛋白及动物类蛋白，但目前乳源ACE抑制肽主要是以牛乳为原料，对羊乳尚未涉及到。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，制备的ACE抑制肽能够对高血压患者产生显著的降压作用，并且对正常的血压无影响，具有无毒副作用、安全性高、易吸收的特点。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案为：一种酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，步骤如下：

步骤1：将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4℃，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳；

步骤2：将所得脱脂乳在35-75℃范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0-1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.2-5.0，使酪蛋白进行沉淀，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，弃去上清液，将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为-40℃预冻12-24h，再转移到冷冻干燥机在-55℃下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白最大得率及条件；

步骤3：将上述步骤所得酪蛋白冻干粉制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液100ml，分别用蛋白酶K、胃蛋白酶、中性蛋白酶、Alcalase、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种蛋白酶进行水解反应1-8h，酶与酪蛋白溶液的质量比为1：10，用恒温水浴箱及1mol/lNaOH溶液分别调整酪蛋白溶液的温度和PH,测试不同种类的酶较优的水解条件及在该条件下达到的ACE抑制率，每间隔1h将5ml水解液在90℃水浴中保持10min使酶失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制率；

步骤4：在确定酶的种类及其较优水解条件的基础上，以ACE抑制率为指标，对水解过程进行优化，确定出该种类酶最佳的水解温度、PH、水解时间、酶与酪蛋白溶液的质量比；

步骤5：在确定最佳水解条件的基础上，检测在不同超声功率（0、90、180、225w）条件下对水解反应的影响。