[发明专利]一种弱阳离子交换/疏水双功能混合模式色谱固定相及其制备方法和应用

权利要求书

1.结构通式（I）所示的色谱固定相， 

   

其中代表硅胶微球；

n=5~20；

R为-CH₂-CH₂-, -CH₂-CHCH₃-, -CH₂-CH₂-CH₂-,, 或。

2.根据权利要求1所述的色谱固定相，其特征在于：所述的硅胶微球粒径为3～40μm，孔径为5～30 nm。

3.权利要求1所述色谱固定相的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）硅胶微球在盐酸中活化；

（2）活化后的硅胶微球清洗至中性，在pH为4.0~6.0的缓冲溶液中与γ-缩水甘油环氧丙基三甲氧基硅烷反应得到γ-缩水甘油环氧丙基三甲氧基硅烷活化的硅胶微球；

（3）将步骤（2）活化的硅胶微球在二氧六环溶剂中与分子量为200-1000的聚乙二醇反应，催化剂为三氟化硼乙醚，反应完后经洗涤、干燥得到聚乙二醇键合硅胶衍生物；

（4）将PEG键合硅胶衍生物分散在二氧六环溶剂中，加入聚乙二醇键合硅胶衍生物1.5～3倍重量的丁二酸酐、邻苯二甲酸酐、1,2,4-苯三酸酐、戊二酸酐、2-甲基琥珀酸酐或2,3-吡啶二羧酸酐，在催化量的4-二甲氨基吡啶催化下反应得到结构式（I）所示的色谱固定相。

4.根据权利要求3所述混合模式色谱固定相的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，硅胶微球用质量百分比浓度为20% 的HCl，经超声处理后在90~120℃回流活化，所述的硅胶微球粒径为3～40μm，孔径为5～30 nm。

5.根据权利要求3所述混合模式色谱固定相的制备方法，其特征在于：步骤（2）中， pH为4.0~6.0的缓冲溶液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

6.根据权利要求3所述混合模式色谱固定相的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，每克硅胶微球加入0.5～1mL γ-缩水甘油环氧丙基三甲氧基硅烷。

7.根据权利要求3所述混合模式色谱固定相的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，每克硅胶微球加入1.5～2.5 mL分子量为200-1000的聚乙二醇反应。

8.根据权利要求3所述混合模式色谱固定相的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，反应温度在20~90℃。

9.权利要求1所述的色谱固定相在蛋白质分离及纯化中的应用。