[发明专利]鼠抗人T细胞抗原ZCH-2B8a单抗可变区基因及用途

说明书

技术领域

本发明属生物技术，主要涉及鼠抗人活化T细胞新抗原ZCH-2B8a（简称2B8a）单克隆抗体（单抗）可变区基因的克隆、测序及其在再生障碍性贫血等免疫相关疾病诊治中的用途。

背景技术

机体免疫系统有免疫防御、免疫监视和免疫自稳的功能，T细胞在上述过程中起着举足轻重的作用。T细胞根据其分化状态和功能可分为初始、效应和记忆T细胞。初始T细胞必须先经过活化转变为效应T细胞才能在免疫应答中发挥作用。T细胞活化的正向和负向调控的平衡对免疫系统的稳定至关重要，任何一方的绝对优势都将引起疾病的发生。如T细胞在再次免疫应该过程中反应过强可以出现超敏反应引起组织损伤；体内存在针对自身抗原的自身反应性T细胞可以导致多发性硬化、胰岛素依赖性糖尿病和类风湿性关节炎等自身免疫性疾病；抑制性T细胞的功能过亢、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肿瘤抗原不能识别或T细胞信号转导的缺陷可以导致肿瘤的发生；T细胞对同种异型抗原的识别是发生移植物抗宿主病（GVHD）的基础^[1]。因此，T细胞的稳态是维持机体健康的基础，对于诸多免疫相关性疾病，纠正T细胞失衡的状态则有望治愈疾病。例如，在类风湿性关节炎、炎症性肠病、GVHD等病灶部位都可以发现OX40^＋T细胞及OX40L^＋细胞的浸润^[2]。因此，靶向OX40可能可以减少自身抗原反应性的T细胞，对上述疾病具有潜在的治疗价值。OX40靶向治疗主要是采用OX40L抗体或OX40Ig阻滞OX40-OX40L^[3]，也有采用OX40耦联免疫毒素清除OX40^＋T细胞^[4]，均在实验性自身免疫性脑脊髓炎等动物模型中取得了一定的疗效。利用单克隆抗体及其免疫毒素靶向杀伤活化T细胞以治疗免疫相关性疾病的理念已在临床研究中广泛开展。目前在进行I期和II期临床试验的就包括抗CD3、CD5、CD7及IL-2R的单抗及其免疫毒素，针对T细胞活化分子VLA-4、CD40L、OX40等的单抗在临床前研究中也显示了良好的应用前景^[5]。

在儿童血液系统疾病中，再生障碍性贫血（AA）、噬血细胞综合征（HLH）等疾病的发生均与T细胞的过度活化、免疫失调密切相关。在AA，免疫抑制剂的治疗效果已非常肯定，可以使70%的患儿得到基本治愈^[6]。但一般治疗过程需要数年，药物的毒副作用也非常大，况且仍有30%左右的病人治疗反应不佳。而HLH则是由于自身的免疫缺陷致病原体难以清除，导致T细胞过度活化和细胞因子风暴而损伤脏器，该病进展迅速、死亡率非常高，基本的治疗手段也是通过激素、环孢素及依托泊苷等药物抑制或杀灭T细胞而使疾病缓解^[7]。我们在研究中也发现，上述病人的外周血T细胞表面T细胞活化分子呈高表达，这也为利用靶向活化分子杀伤活化的T细胞提供了理论基础。

ZCH(Zhejiang Children’s Hospital)-2B8a（简称2B8a）是鼠抗人造血细胞分化抗原的单克隆杂交瘤细胞株，以分化早期的CD34+白血病细胞KG1a作为免疫原，采用经典杂交瘤技术制备而成。经三次亚克隆培养，建立了能稳定分泌2B8a抗体的杂交瘤细胞系。该抗体经递交第8届国际人类白细胞分化抗原协作组会议（8^th International Workshop and Conference on Human Differentiation Antigens,HLDA8）鉴定后认为该抗体识别的抗原性质不明，属国际上尚未认识的造血细胞膜新的分化抗原或新的CD分子。研究表明，该抗体与正常外周血静止期T细胞不反应，但与活化的T细胞反应强烈，可能识别新的活化T细胞分子。因此，2B8a抗体具有开发成为靶向杀伤活化T细胞的大分子药物的临床应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种鼠抗人活化T细胞抗原（ZCH-6-2B8a单抗，简称2B8a单抗）单抗的重链和轻链可变区基因，该单抗的重链可变区基因的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 3所示；该单抗的轻链可变区基因的核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示。