[发明专利]血管周围间充质前体细胞

说明书

本申请是2004年3月29日提交的题为“血管周围间充质前体细胞”的中国专利申请200480014698.7的分案申请。

发明领域

本发明涉及间充质前体细胞，及携带血管周围标记的这种前体细胞亚群的分离。

发明背景

由于间充质前体细胞(mesenchymal precursor cell)在医学应用方面的潜力，针对分离和富集间充质前体细胞已经进行了许多尝试。Pittinger et al.,(1999)显示出克隆发生细胞(clonogenic cell)从骨髓中的扩增，并描述了扩大的间充质干细胞的制备。这种方法的最近实例提供了从骨髓中相对高产量生产的方法，见Simmons等的公开WO01/04268所述。

然而，迄今为止还未有可以从广泛的组织中分离间充质前体细胞的方法的实例。

发明概述

本发明建立在发现多能间充质前体细胞(MPC)群存在于血管周围微环境（perivascular niche）中的基础上。WO01/0426指出除了单一的组织骨髓之外还有MPC来源的更广泛的组织类型。本发明建立在另外发现富集的MPC群可以分化为由标记3G5区别的两种群体的基础上。认为3G5阳性的MPC特别用于新血管形成，尽管它们确实也显示出分化为其它组织类型。本发明另外发现本发明的优选的富集细胞群中存在的MPC的水平能产生足够数目的定型细胞(committed cell)以提供许多分化的组织类型。

本发明第一方面的第一种形式涉及一种富集间充质前体细胞(MPC)的方法，所述方法包括制备从血管化的源组织(vascularized source tissue)中制备单细胞悬浮液的步骤，及基于早期血管周围细胞标记的存在进行富集的步骤。

本发明第一方面的第二种形式涉及一种富集间充质前体细胞的方法，所述方法包括从非骨髓的血管化的源组织中制备单细胞悬浮液的步骤，及将组织分离成单独的细胞的步骤，以及基于一或多个早期发育标记的存在或水平和表示定型的一或多个表面标记的不存在而进行富集的步骤。

本发明第一方面的第三种形式涉及一种富集间充质前体细胞(MPC)的方法，所述方法包括从血管化的源组织中制备单细胞悬浮液的步骤，及基于在血管化的组织中由血管周围细胞表达的标记的存在情况而进行富集。

本发明的第二方面涉及一种富集间充质前体细胞(MPC)的富集的细胞群，所述MPC具有3G5、MUC18、VCAM-1、STRO-1^bri和α-平滑肌肌动蛋白的表型。

本发明第三方面的第一种形式涉及一种分离的间充质前体细胞(MPC)，所述MPC具有3G5、MUC18、VCAM-1、STRO-1^bri和α-平滑肌肌动蛋白的表型。

本发明的第三方面的第二种形式涉及一种分离的哺乳动物细胞，其是多能的并且对于表面标记3G5是阳性的。

本发明的第三方面的第三种形式涉及一种间充质前体细胞(MPC)，其能形成克隆发生集落(clonogenic colony)并分化为三或多种间充质组织类型，分离自包含但不限于脂肪组织、牙齿、牙髓、皮肤、肝、肾、心脏、视网膜、脑、毛囊、肠、肺、脾、淋巴结、胸腺、胰腺、骨、韧带、骨髓、肌腱和骨骼肌的组织，并且对于表面标记STRO-1是阳性的。

本发明的第三方面的第四方面涉及一种富集间充质前体细胞(MPC)的未被扩增的细胞群，其能形成克隆发生集落并分化为三或多种间充质组织类型，所述MPC共表达表面标记MUC18/CD146和α-平滑肌肌动蛋白。

本发明的第四方面涉及一种优选地从本发明的第三方面产生的分化的子代细胞，其中所述子代细胞至少是成骨细胞、成牙本质细胞、牙本质产生细胞、软骨细胞、肌腱、韧带、软骨、脂肪细胞、成纤维细胞、骨髓基质、破骨细胞和造血支持基质、心脏肌、平滑肌、骨骼肌、周细胞、血管、上皮、神经胶质细胞、神经元、星形胶质细胞或少突胶质细胞。

附图简述