[发明专利]生物样品处理组合物与方法

说明书

本申请是国际申请日为2007年1月12日的国际申请PCT/US2007/000980进入中国、申请号为200780003025.5的题为“生物样品处理组合物与方法”的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本发明要求美国专利申请号为60/759,240的临时申请的优先权，所述临时申请于2006年1月13日提出申请，通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及用于处理生物样品的组合物和方法，所述样品比如细胞和组织，用于显微镜观察。更特定地，本发明涉及组合物和方法，其能增加染色细胞或组织样品中可观察的细胞细节的对比度、色彩平衡和数量。此外，本发明涉及组合物和方法，对于在促进其中溶剂蒸发的条件下以较高温度处理的生物样品，所述组合物和方法能够保持和/或恢复生物样品。

背景技术

大多数细胞和组织都缺乏充足的固有颜色和对比度来进行其形态的详细显微镜分析。结果通常用一种或多种彩色染料将细胞和组织染色，以增强细胞之间和亚细胞特征之间的对比度。用通过染色显示的特征可以诊断各种不同的疾病和状况。

作为很多通常染色过程的辅助，将细胞或组织样品与各种溶剂和溶剂混合物接触。使用溶剂，例如将蜡包埋(paraffin-embodded)样品脱蜡，制备可以用非极性染料处理的样品，或者制备用于盖玻片(coverslip)的样品。很多溶剂，如乙醇、柠檬烯、二甲苯和含水清洁剂溶液易于从细胞膜中提取脂质化合物。结果在处理过程中，特别是如果在较高温度处理以帮助蒸发溶剂时，细胞形态改变，而且细胞变得更易于受到损害。因此，需要方法和组合物，其可以帮助保护细胞和组织样品在处理过程中免受损害，并帮助恢复受损或改变的细胞结构。此外，需要方法和组合物，其可以通过增加样品中可观察的细胞细节的对比度、色彩平衡和数量来增加组织染色细胞的临床效用。

发明内容

公开了组合物和方法，其包括用于促进保持、恢复和/或增强染色的生物样品中可观察的细胞和组织形态的脂质化合物。例如，所述组合物和方法能够提供透明度和分辨率增加的细胞和亚细胞结构，使观察者可以更容易地分辨不同的组织元素，并显现样品中细微的微解剖学细节。细胞结构，比如膜和核特征，在H&E染色的组织部分中能够变得清晰可见，所述组织部分接触过脂质化合物。此外，H&E染色的样品中的对比度和色彩平衡能够根据本公开而改善。细节的增强和对比度与色彩平衡的改善对根据染色的生物样品做出诊断有帮助。

在一个方面，公开了用于处理生物样品的方法，其可以增加细胞和亚细胞分辨率，并改进样品的对比度和色彩平衡。在一个特定实施方案中，所述方法包括向染色样品施加盖玻片组合物，其中所述盖玻片组合物包括盖玻片溶剂和脂质化合物。一旦应用盖玻片组合物，就将盖玻片置于样品上。因为盖玻片组合物中包括脂质化合物，所以与只使用盖玻片溶剂进行盖片(coverslipping)的基本近似的样品相比，能够观察到对比度和细胞与亚细胞分辨率增加，对比度增加和色彩平衡得到改善。在与自动染色技术组合使用时，所述技术对每个染色载玻片都使用新鲜试剂，在自动化过程(比如在盖片步骤)之中使样品与脂质化合物接触能够使载玻片的临床效用增加。

在另一方面，公开了包括盖玻片溶剂和脂质化合物的盖玻片组合物。盖玻片组合物中的脂质化合物可以是清洁剂脂质化合物或非清洁剂脂质化合物。有用的非清洁剂脂质化合物包括脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇、脂肪胺、脂肪醚、聚硅氧烷、聚醚和类异戊二烯中的一种或多种。

在还更进一步的方面，公开了方法，当在促进样品中溶剂蒸发的条件下，将样品置于较高温度时，所述方法用于处理显微镜载玻片上的生物样品。在这个方面，所述方法包括：用组织化学过程处理样品，提供染色样品；在促进样品中溶剂蒸发的条件下，将样品置于较高温度；和使样品与脂质化合物接触。在特定实施方案中，在组织化学过程中，使样品接触一种或多种脂质提取溶剂，并在处理过程中用脂质化合物处理生物样品，用该脂质化合物取代样品中去除的脂质含量的至少一部分。样品的“重脂质化”可以恢复在处理过程中变得不清晰的组织形态，并提供很多益处，包括防止(和/或去除)由于将样品置于较高温度和蒸发条件而导致的假象(artifact)和形态变化。加入脂质化合物还能够同时增加由量视野显微镜可观察的细胞和亚细胞的分辨率。

附图说明

图1是示意图，表示盖片步骤中包含脂质化合物的自动H&E过程。