[发明专利]一种检测人PSCA基因突变的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种检测人PSCA基因第一外显子突变的核苷酸序列的检测试剂盒。

背景技术

近年来，通过运用比较基因组学，人们发现了基因组中存在大量单碱基突变现象，这些位点被称为SNP(single nucleotide polymorphism)，单核苷酸多态性位点。这其中，位于基因编码区（外显子）内的SNP，且又导致其对应的蛋白质序列发生改变的，又被称为非同义cSNP（non-synonymous coding SNP）。这些变异率仅是周围序列的1/15。这些突变往往是蛋白质功能异常，生物体性状变异的直接原因，因此在遗传研究和疾病分子机制研究中具有重要意义，也被称为第三代遗传标记。

胃癌，肠癌和膀胱癌是三大常见的恶性肿瘤。其中膀胱癌排名第四，是我国最常见的泌尿系统恶性肿瘤，且发病率呈逐年上升的趋势。肠癌是肠胃道中最常见的恶性肿瘤，发病率排名第三。胃癌的发病率在我国排名第二，死亡率排名第三，全世界每年新增的胃癌病人中有近一半是中国人。

PSCA基因是prostate stem cell antigen的简写，中文名称前列腺干细胞抗原。该基因位于人第8号常染色体第24带区。基因全长9.3kb,有3个外显子组成,编码一个细胞表面的糖蛋白。主要在前列腺，膀胱，肠道和胃上皮细胞中进行表达，参与调控一系列和细胞生长有关的生物过程。大量的研究表明，由于PSCA基因突变导致其在组织中的异常表达与诱发癌变有密切关系。从2009年至今，来自欧美亚的超过20项的独立研究的结果显示，PSCA基因第一外显子上的rs22940008突变和不仅与胃癌，肠癌和膀胱癌的发病显著相关，还与这些癌症的转移有密切关系。

PSCA基因第一外显子上的rs22940008位点的多态性中，含有CT或TT基因型患者与正常CC基因型有显著差异，这一结果分别在针对北美，欧洲，日本，韩国和中国人群的研究中得到证实。

其中，携带CT基因型的人群得病的几率平均要高出40%，而携带TT基因型的人群得病几率则要高出70%。而携带CT或TT突变的癌症患者的癌细胞攻击性和转移率较阴性癌症患者高出230倍。

由此可见，建立简单快捷的突变检测方法，不仅有助于及时筛查出胃癌，肠癌，和膀胱癌的高危人群，提前进行有针对性的健康干预，而且可以用于对已发癌症病人提供个体化转移预防措施。 

发明内容

PSCA第一外显子上rs22940008突变位点可以用来评估胃癌，肠癌和膀胱癌发病风险，发病后的转移风险和抗雄性激素相关药物的使用。

本发明提供一种用于检测PSCA第一外显子上rs22940008突变位点的检测试剂盒，包括：

（1） 检测PSCA基因上rs22940008突变位点的特异性引物；

（2） PCR扩增反应试剂（包括Taq酶，dNTP混合液，反应缓冲液，无菌去离子水）；

（3） DNA测序反应试剂（包括BigDye mix,EDTA溶液，100%乙醇，70%乙醇，HIDI溶液，无菌去离子水）;

本发明试剂盒的组分和含量包括：

（1） PCR反应体系：10XPCR反应缓冲液5μl；10mM的dNTP混合液1μl；5U/μl的Taq DNA聚合酶0.5μl；特异引物各1μl；无菌去离子水36.5μl；

（2） 测序反应体系：25%的BigDye mix 1μl；DNA测序引物1μl；125mM的EDTA溶液1μl；100%乙醇溶液15μl；70%乙醇溶液30μl；HIDI溶液10μl;无菌去离子水10μl；

（3） 本试剂盒可用于一个样本的检测，试剂盒的保存温度为-20℃。

（4） 根据检测结果确定样品中是否存rs22940008突变，从而给出临床指导意见。 

附图说明

图1：C/T突变型测序图谱,测序结果为：CCAGTGACCA[C/T]GAAGGCTGTG,图中51号位基因型的判断区。

图2：T/T突变型测序图谱,测序结果为：CCAGTGACCA[T]GAAGGCTGTG,图中51号位基因型的判断区。

具体实施方式

本发明的具体实施方式仅对本发明的内容做进一步的解释和说明，并不对本发

明的应用范围进行限制。实例中未注明具体条件的实验方法，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1.检测试剂盒的使用

1. 提取样品DNA