[发明专利]一株血清4型副猪嗜血杆菌疫苗株

说明书

技术领域

本发明涉及兽医生物制品中副猪嗜血杆菌病疫苗领域，特别是涉及一株血清4型副猪嗜血杆菌株。 

背景技术

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPs）为巴氏杆菌科嗜血杆菌属中的一种革兰氏阴性球杆菌，是猪的一种条件性病原菌，呈世界性分布，感染仔猪后引起以多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的猪格拉泽氏(Glasser’s)病。主要危害2～8周龄的仔猪，发病率一般为10%～15%，死亡率可达50%以上。 

副猪嗜血杆菌对营养要求苛刻，生长严格需要V因子（NAD），目前认为胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养基与胰蛋白胨大豆（TSB）培养基是培养副猪嗜血杆菌的最适培养基。在添加NAD的TSA平板培养基上培养24h可见针尖大小灰白色菌落，呈隆起圆形，表面光滑、湿润、边缘整齐。HPs在巧克力琼脂平板上生长困难，有报道显示，巧克力平板上HPs不能进行传代培养，不适用于体外传代培养，但巧克力琼脂平板可以用于分离该菌，初次分离培养时供给5%～10%的二氧化碳（CO₂）可促进生长。液体培养时需要在肉汤或TSB培养基中添加血清与V因子（NAD），但添加V因子浓度不断增加细菌浓度不会随之升高。由于葡萄球菌生长过程中会将自身代谢产物V因子释放到培养基中，所以HPs与金黄色葡萄球菌共同接种于鲜血琼脂平板培养，HPs在金黄色葡萄球菌两侧生长良好，随着与金黄色葡萄球菌距离增加，菌落逐渐变小，该现象被称为卫星现象。HPs对外界环境抵抗力极弱，体外培养极易死亡。 

HPs菌株间抗原性和毒力差异很大，血清学分型是区别不同菌株的重要方法之一。目前，由Kielstein等1992年提出的基于热稳定抗原免疫扩散试验的血清学分型方法(KRG)已在世界范围内被接受，该方法将HPs分成15个血清型，然而有15.2%～41%的分离株血清型不能确定。根据日本、德国、美国和西班牙等国的血清流行病学调查，以血清型4、5和13最为流行。HPs在我国普遍流行，目前，在河北、河南、湖北、湖南、安徽、上海、广东、江西等12个省市均有副猪嗜血杆菌病发生和分离出HPs的报道。 

由于兽医临床上常常大量甚至不合理使用抗菌药，致使猪场细菌在药物压力下选择 出耐药菌群。因此，用药物防控副猪嗜血杆菌病的难度越来越大，而且随着人们对食品安全问题的担忧，抗生素在防控动物疾病方面的应用会更少，而将发挥更大作用的是相应的疫苗。HPs血清型较多，且不同血清型菌株的毒力与致病力差异较大，各个血清型之间免疫交叉保护力很低，所以，现有国内外商品化的副猪嗜血杆菌病疫苗均不能对该病提供完全有效的保护。因此，分离筛选免疫原性强的通用型HPs菌株，并利用其制备高效疫苗是防控副猪嗜血杆菌病的重中之重。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一株血清4型副猪嗜血杆菌疫苗株（FS0307株），该疫苗株具有较强的毒力和很高的免疫原性。 

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下： 

一株血清4型副猪嗜血杆菌疫苗株，其分类命名为副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis），菌株号为FS0307，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC NO:M2013094，保藏日期：2013年3月21日。该菌株是发明人于2003年4月于河北省衡水市自行采集筛选获得一株具有较强的毒力和很高的免疫原性的菌株。 

上述血清4型副猪嗜血杆菌疫苗株在制备治疗猪副猪嗜血杆菌病药物中的应用。 

其中，所述的药物为疫苗，优选油包水型疫苗、或水包油型疫苗、或水包油包水型疫苗。 

其中，血清4型副猪嗜血杆菌疫苗株与药学上可接受的载体或辅料组合构成药物，如单价苗、多价苗或联苗等等。 

其中，所述血清4型副猪嗜血杆菌疫苗株在疫苗中含菌量为2×10⁹CFU/mL以上。 

有益效果：本发明的血清4型副猪嗜血杆菌FS0307株具有稳定的生物学特性，对仔猪有较强的致病性，且具有良好的免疫原性。应用其制备的油佐剂灭活疫苗安全可靠，能够产生较高水平的抗体，持续期长，并且对同源菌种攻毒的猪具有非常好的保护效果，免疫后猪群的发病率和死亡率均明显减少，其免疫效果均达到或优于市场上现有的商品化疫苗，能够有效预防副猪嗜血杆菌的流行。 

具体实施方式