[发明专利]一种高效液相色谱法测定二盐酸奎宁注射液中二盐酸奎宁含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种液相色谱定量分析方法，具体要求保护的是一种测定二盐酸奎宁注射液中二盐酸奎宁含量的高效液相色谱方法。

背景技术

二盐酸奎宁注射液为二盐酸奎宁的灭菌水溶液，无色或微黄色的澄明液体。见图1为二盐酸奎宁结构式。二盐酸奎宁，性状为白色粉末，无臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显酸性反应。在水中极易溶解，在乙醇中溶解，在氯仿中微熔，在乙醚中极微溶解。二盐酸奎宁为喹啉类衍生物，能与疟原虫的DNA结合，形成复合物，抑制DNA的复制和RNA的转录，从而抑制原虫的蛋白合成。

国内对于二盐酸奎宁注射液中二盐酸奎宁含量测定的研究尚少，中国药典关于二盐酸奎宁含量检测标准的制定与检测方法的实施均基于滴定法。该方法操作繁琐，试剂用量大，无法排除生物碱同系物的干扰影响结果准确性，操作灵敏度不及高效液相色谱法。高效液相色谱精确度好，灵敏度高，保证了本发明分析方法的准确性和可靠性。近年来随着高校液相色谱的广泛应用，建立一种利用高效液相色谱法测定二盐酸奎宁注射液中二盐酸奎宁含量具有重要的意义。

发明内容

本发明目的是提供高效液相色谱法测定二盐酸奎宁注射液中二盐酸奎宁含量的方法，具体通过以下技术方法实施。

色谱条件：

色谱柱选用十八烷基键合硅胶为填充剂的反相色谱柱。

流动相中加入磷酸缓冲液的成分，灵敏度更高，故本发明流动相为乙腈与磷酸缓冲液的混合溶液，乙腈的比例为5％～25％，优选10％。磷酸缓冲液配制方法为：称取6.8g磷酸二氢钾，用1000ml水溶解，磷酸调PH至4.0。

一个优化实验中，流动相中乙腈和磷酸缓冲液的体积比优选5％～25％：75％～90％，进一步优选10％。不同的流动相比例对应的峰分离度和出峰时间见表1。

表1不同的流动相比例对峰分离度和出峰时间的影响

根据中国药典对分离度大于等于1.5的规定，优选乙腈比例为10％。

检测器选用紫外检测器，检测波长为316nm。

流速为1ml/min，进样体积5μl。

溶液配制：

标准品溶液：精密称定60mg标准品，置于100ml容量瓶，加一定量的流动相超声15min将样品溶解，再用流动相定容至刻度线，所得溶液继续用流动相稀释10倍制成60mg/ml浓度的标准品溶液。

标准品溶液配制选择的浓度可根据样品溶液浓度进行选择，优选浓度在50μg/ml～1mg/ml，优选称量重量不低于40mg。

供试品溶液：精密量取一定量二盐酸奎宁注射剂，用流动相稀释至与标准品溶液相同浓度。

本发明采用外标法进行二盐酸奎宁注射液中二盐酸奎宁的含量进行测定。上述标准溶液和供试品溶液分别配制三个，设定进样体积为5μl，分别进样，所得峰面积带入以下公式计算：

二盐酸奎宁(％)＝A₁×C₂/A₂×C₁

其中：A₁为待测样品峰面积；A₂为标准品峰面积；C₁待测样品浓度(mg/ml)；C₂标准品浓度(mg/ml)；代入数据即可得到二盐酸奎宁含量。

附图说明

图1为二盐酸奎宁结构式

图2为二盐酸奎宁标准品图谱

图3为浙江天丰生物科学有限公司130301批二盐酸奎宁注射液图谱

具体实施方式

实施例1：

供试品溶液：取浙江天丰生物科学有限公司产130301批二盐酸奎宁注射液，规格为60mg/2ml/支，精密量取注射液2.5ml，置于25ml容量瓶，流动相稀释至刻度制成3mg/ml作为溶液(1)，溶液(1)继续用流动相稀释50倍，制成相当于60μg/ml二盐酸奎宁溶液作为待测液。

标准品溶液：精密称定60mg标准品，置于100ml容量瓶，加一定量的流动相超声15min将样品溶解，再用流动相定容至刻度线，所得溶液继续用流动相稀释10倍制成60mg/ml浓度的标准品溶液。

测定条件：选用Thermo C18(4.6×250mm5μm)色谱柱，Agilent1260高效液相色谱仪，流动相为乙腈∶磷酸缓冲液(10∶90)，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测器为紫外检测器，检测波长316nm，进样体积5μl。