[发明专利]油茶良种长林4号和32号分子特异性标记引物及鉴定方法

权利要求书

1.油茶良种长林4号和32号的分子特异性标记引物，所述引物序列如下：

上游引物：5′-CCTATGGTGCCTCTTTGTTTGATGT-3′；

上游引物：5′-GTGACAAGTTGAACTCTAGCACAAA-3′。

2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物对油茶良种长林4号和32号进行快速鉴定的方法，所述方法为：提取待测油茶品种叶片的基因组DNA作为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现350bp的DNA条带，则待测油茶品种为油茶良种长林4号或32号；所述分子特异性标记引物序列为：

上游引物：5′-CCTATGGTGCCTCTTTGTTTGATGT-3′；

上游引物：5′-GTGACAAGTTGAACTCTAGCACAAA-3′。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述PCR扩增条件如下：95℃预变性4min；95℃变性1min，60℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：

（1）取待测油茶叶片，加液氮磨碎，以SDS-CTAB法提取待测油茶叶片的基因组DNA；

（2）以步骤（1）提取的基因组DNA为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增：

PCR反应体系每25μl组成如下：

PCR反应条件如下：

95℃预变性4min；95℃变性1min，60℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃；

（3）取步骤（2）扩增产物5μl，与1μl0.25%溴酚兰缓冲液混匀，点样于1.5%的琼脂糖凝胶上，于1×TAB缓冲液中、5V/cm电压下电泳，电泳结束后EB染色，于自动凝胶图像分析仪上照相，若电泳结果出现350bp的DNA条带，则待测油茶为长林4号或32号。