[发明专利]一株柠檬酸高产菌株及其筛选方法

权利要求书

1.一株柠檬酸高产菌株，其特征在于：该菌株命名为TN-A09，其保藏号为CGMCC No.5751。

2.根据权利要求1所述的高产菌株，其特征在于：该菌株由代号Co827的黑曲霉诱变而来。

3.权利要求1所述的高产菌株的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）、将黑曲霉Co827接种于PDA斜面，在35℃条件下静止培养4天，斜面长满孢子后用无菌水冲洗孢子至带玻璃珠的无菌三角瓶中，每支斜面洗到一只三角瓶中，用纱布包扎；

（2）、将盛有孢子悬液的三角瓶放摇床上振荡2小时，转速270r/min，温度25℃，充分打散孢子；

（3）、将灭过菌的真空抽滤瓶放超净工作台内，打开电源真空泵开始工作，将孢子悬液倒入抽滤瓶上的漏斗中，抽滤过程应在漏斗上覆盖四层无菌纱布，抽滤过程持续3分钟；

（4）、抽滤完毕，用无菌镊子取下抽滤膜，放入无菌的空培养皿中，移入灭菌后的常温干燥器中干燥24h；所述的干燥器事先经70wt%乙醇擦洗两遍达到表面消毒，并在超净工作台内经紫外灯照射30分钟，使干燥器内部空间完全灭菌；

（5）、在超净工作台中将干燥好的孢子用接种铲刮进无菌的样品瓶内，将样品瓶装满，盖好盖子，样品准备完毕；

上述步骤（5）获得的样品通过搭载返回式航天器进行太空诱变，诱变获得的干孢子经过耐高糖高酸的定向筛选获得的菌株即为目标菌株，其保藏号为CGMCC No.5751。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

所述的耐高糖高酸的定向筛选采用高糖高酸培养基培养定向筛选，具体步骤为：

取航天诱变后干孢子100μg到100ml无菌水中摇匀成孢子悬液，然后10倍梯度稀释到10^-4，从10^-3、10^-4稀释度各取100μl均匀涂布于上述高糖高酸培养基上，35℃静止培养96h，观察培养基表面生长出白色小菌落，即为具有耐高糖高酸性能的菌株。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的高糖高酸培养基制备方法如下：

A液制作：马铃薯去皮，200克切成块煮沸30min，然后用纱布过滤后补足水至1000mL，121℃灭菌15min，备用；

B液制作：葡萄糖200-220克，无水柠檬酸170-190克，MgSO₄·7H₂O1.5克，K₂HPO₄3.6，硫酸铵2克，琼脂粉22克，溶于500ml蒸馏水，113℃灭菌15min，备用；

将A液和B液分别加热至50℃，使B液充分融化后，分别取A液、B液各500毫升混合均匀，倒入培养皿中，冷却备用即为高糖高酸培养基。