[发明专利]一种从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法

权利要求书

1.一种从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于：将手术或活检标本用中性福尔马林固定，脱水，石蜡包埋，切多张白片，选择其中一张白片行HE染色，在光学显微镜下观察HE染色片的肿瘤组织细胞分布，并标记出靶细胞的分布区域；剩余白片经烤片后再进行二甲苯脱蜡，然后对照标记好的HE染色片将白片上富含靶细胞的组织刮下富集靶细胞，最后对富集的靶细胞进行核酸提取，即可。

2.根据权利要求1所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将手术或活检标本先用中性福尔马林固定，然后进行组织脱水、浸蜡、石蜡包埋和切片；

（2）控温60～95℃，考片15~60min，使蜡片牢固地粘附在玻片上；

（3）用二甲苯对切片脱蜡；

（4）选择其中一张切片行病理标准程序上的HE染色，并在常规光学显微镜下观察，标记出靶细胞分布范围；

（5）剩余白片用乙醇水溶液由高浓度逐级下行至低浓度乙醇水溶液清洗二甲苯，接着将白片置于清水中清洗掉乙醇；

（6）对照标记好的HE染色片，将清洗掉乙醇的剩余白片上富含靶细胞的组织用刀片刮下，富集靶细胞，并立即转到离心管内；

（7）按常规方法提取靶细胞核酸。

3.根据权利要求2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，步骤（1）中，巨大器官组织要切开固定8～24h，小块组织的固定时间3.5~4.5h。

4.根据权利要求2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，步骤（1）中，由低浓度逐级上行至高浓度乙醇水溶液脱水，乙醇水溶液的浓度为70～100%。

5.根据权利要求2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，步骤（1）中，用于浸蜡的石蜡熔点为56～58℃。

6.根据权利要求2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，步骤（1）中，石蜡包埋时，把组织最大最平切面或所需的病灶切面向下，对皮肤、肠管和囊壁等层次清楚的组织其切面应包含有各层组织。

7.根据权利要求2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，步骤（1）中，切片的厚度为4-10μm。

8.根据权利要求2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，所有操作步骤，禁止细胞片裸露在空气中。

9.根据权利要求2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，所述的HE染色片为：从手术病理石蜡包埋组织、穿刺组织、胃肠镜活检以及细胞涂片中通过正常病理步骤切片、染色得到的HE染色片。

10.根据权利要求1或2所述的从标本中快速富集并提取靶细胞核酸的方法，其特征在于，所述的核酸包括DNA、RNA和miRNA。