[发明专利]一种检测生物体内微囊藻毒素MC-LR的方法无效

专利信息
申请号: 201310120054.7 申请日: 2013-04-09
公开(公告)号: CN103197021A 公开(公告)日: 2013-07-10
发明(设计)人: 刘利平;苏晓明;陈桃英 申请(专利权)人: 上海海洋大学
主分类号: G01N30/88 分类号: G01N30/88;G01N30/06
代理公司: 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 代理人: 曹翠娟
地址: 201306 上海市*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 生物 体内 微囊藻 毒素 mc lr 方法
【权利要求书】:

1.一种检测生物体内微囊藻毒素MC-LR的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)微囊藻毒素MC-LR的提取:称取冷冻干燥的生物组织样品于研钵中研碎,向研碎后生物组织样品中加入提取液,匀浆,超声破碎,离心,移取上清液至干净容器中避光保存,再加入提取液清洗沉淀,离心后收集上清液,合并所得上清液;所述提取液为EDTA-Na2的甲酸水溶液,EDTA-Na2的浓度为0.01~0.05mol/L,甲酸的体积百分比浓度为1%~5%;

(2)微囊藻毒素MC-LR的富集、分离与纯化:将步骤(1)中所得的上清液加入已预先活化的HLB固相萃取柱进行富集,先用超纯水淋洗,再用体积百分比浓度为10%的甲醇水溶液淋洗,最后用无水甲醇洗脱,收集洗脱液用氮气吹干,所得固体用甲酸-甲醇-水溶液溶解制成样品待测液,所述甲酸-甲醇-水溶液中,甲酸的体积百分比浓度为1%,甲醇的体积百分比浓度为20%;

(3)定性分析:采用UPLC-MS联用方法,根据微囊藻毒素MC-LR标准品的保留时间和特征碎片离子峰的荷质比m/z 进行定性;

色谱条件:流动相A为含体积百分比浓度为0.1%甲酸的水溶液,流动相B为含体积百分比浓度为0.1%甲酸的甲醇溶液;色谱柱:C18柱,100mm×2.1mm,1.8μm;柱温:40℃;进样体积为10μL;流速为0.35mL/min;UPLC梯度洗脱程序见下表:

质谱条件:电喷雾离子源(ESI),正离子模式扫描,多反应监测(MRM)方式检测;毛细管电压为3.5kV;雾化温度为450℃;雾化作用和喷雾作用均使用氮气,氮气流速分别为850 L/h和50 L/h;质谱分析的条件参数见下表:

(4)定量分析:使用外标法,用色谱峰面积定量,用体积百分比浓度为20%的甲醇水溶液配制微囊藻毒素MC-LR标样系列,微囊藻毒素MC-LR浓度范围为0~250ng/mL,在与样品待测液相同的色谱条件下直接进样,以微囊藻毒素MC-LR的浓度为横坐标,相应的色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,由其回归方程对样品待测液进行定量。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的生物体为虾或大型溞。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中所述的离心条件为3000~8000r/min,超声破碎时间3~5min,超声破碎温度0~4℃。

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