[发明专利]一种干式免疫检测试纸条及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于临床医学诊断领域，具体涉及一种干式免疫检测检测试纸条及其制备方法与应用。 

背景技术

现如今干式免疫定量检测一般由体外免疫层析试剂条进行检测，试纸条主要是将亲和技术、印记技术、免疫标记和层析技术的组合，一般包括样品垫、滤血膜、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫等四层到五层（四层一般将滤血功能与样品垫组合），示踪粒子（胶体金、荧光等）标记的抗体包被在结合垫上。 

专利CN102192983A对传统的免疫层析膜的结合方式进行了改变，变成三膜系统——GE公司旗下Whatman开发的膜Fusion5、硝酸纤维素膜、吸水纸，有效地提高了检测的灵敏度和特异性。然而，膜Fusion5孔径较大，抗体难以固定需要制备特殊的STONE用以固定抗体，工艺较为复杂，同时通过专利CN102192983A制备的试纸条层析的时间需要十分钟，检测时间长。 

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种操作简单、层析迅速、特异性强、检测结果准确、稳定性强的干式免疫检测试纸条及其制备方法与应用。 

本发明通过以下技术方案实现：一种干式免疫检测试纸条，在塑料底衬上从左到右依次粘有样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，硝酸纤维素膜右端设有相互平行的质控线和检测线；硝酸纤维素膜左端设有示踪粒子标记抗体/抗原包被线和封闭蛋白线Ⅰ，封闭蛋白线Ⅰ为封闭蛋白液Ⅰ包被硝酸纤维素膜形成的线，抗体/抗原包被线为示踪粒子标记抗体/抗原喷到封闭蛋白线Ⅱ上形成的线，其中，封闭蛋白线Ⅱ为封闭蛋白液Ⅱ包被硝酸纤维素膜形成的线。 

所述的检测线上包被有抗体或抗原，检测线上包被有抗体为针对待测抗原的单抗或多抗，或者为针对待测抗体的抗原的单抗或多抗；检测线上包被抗原为待测抗原的竞争性抗原。 

所述的示踪粒子为胶体金颗粒、荧光颗粒、胶乳颗粒、磁性颗粒中的任意一种。 

所述的荧光颗粒可以是荧光素（cy5、cy7）、羧基荧光素、2-甲氧基荧光素、罗丹明、藻红蛋白、量子点中的一种。 

所述封闭蛋白液Ⅰ与封闭蛋白液Ⅱ均包含酪蛋白与BSA。 

所述的封闭蛋白液Ⅰ的制备方法：用三蒸水溶解质量比为1:5-2:1的酪蛋白与BSA，然后配置成浓度不高于15%的溶液。 

所述的封闭蛋白液Ⅱ的制备方法：用三蒸水溶解质量比为1:5-1:1的酪蛋白与BSA，然后配置成浓度不高于15%的溶液。 

本发明公开了一种干式免疫检测试纸条的制备方法，包括以下步骤： 

（1）样品垫的制备：将样品垫用100mmol/L pH7.2 PBS缓冲液浸泡2～4小时，取出后25℃干燥8小时。

（2）硝酸纤维素膜的处理： 

A、检测线的制备：将待测物质相对应的抗原/抗体用20mmol/L pH7.2的PB缓冲液稀释到2.0mg/ml的浓度，0.8ul/cm在离硝酸纤维素膜右端4.0cm处划线得到检测线；

B、质控线的制备：将兔抗鼠IgG抗体按4mg/ml的浓度，0.8ul/cm在硝酸纤维素膜右端3.5cm处划质控线，该线与检测线平行，与检测线间隔5mm，然后在干燥箱内20℃鼓风干燥12h；

C、封闭蛋白线的制备：将封闭蛋白液Ⅰ包被于硝酸纤维素膜左端6mm处，包被量为1.5ul/cm；

D、示踪粒子标记抗体/抗原包被线的制备：采用封闭蛋白液Ⅱ划线于硝酸纤维素膜左端1.5mm处，包被量为1.3ul/cm，置于25℃干燥2h，然后用示踪粒子标记的抗体/抗原在封闭蛋白Ⅱ的位置划线置于25℃干燥4h，密封干燥保存。

（3）吸水垫的制备：吸水纸裁剪成30*2.7cm每条。 

（4）组装：塑料底衬，样品垫和吸水纸为本领域通用的部件。将上述硝酸纤维素膜、吸水垫、样品垫粘贴在塑料底衬上，将贴好的中间物用斩切机切成一定宽度的试纸条。 

本发明公开了一种干式免疫检测试纸条的应用，所述的干式免疫检测试纸条通过双抗夹心法或者竞争法原理定量测定待测物质，适用于所有的采用双抗夹心或竞争法模式的心肌类、肾脏类、肿瘤类、传染病类等疾病的诊断。 

本发明通过采用包被于硝酸纤维素膜上的示踪粒子标记抗体包被线，且采用封闭蛋白线的方式取代常用的包被示踪粒子标记抗体的结合垫，一方面层析时间只需45s-60s，检测时间大大缩短、特异性与稳定性加强、检测结果更加准确，另一方面，还大大节约了材料，节省了成本。 

附图说明

图1：本发明干式免疫检测试纸条结构示意图； 

图2：C反应蛋白胶体金检测试纸条的标准曲线；