[发明专利]一种富含胸腺肽α1的胸腺肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胸腺肽的制备方法。

背景技术

胸腺肽(又名胸腺素、Thymosin)是一种免疫调节剂，是胸腺组织分泌的具有生理活性的一组多肽。胸腺肽可刺激外周血液淋巴细胞丝裂原来促进T淋巴细胞的成熟，增加抗原或丝裂原激活后T细胞分泌的干扰素α、干扰素γ以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同时增加T细胞表面淋巴因子受体水平。还可通过对CD4细胞的激活，增强异体和自体的人类混合淋巴细胞反应。临床上常用的胸腺肽是从小牛胸腺提取的小分子混合多肽，其主要活性成分是一种分子量为3108道尔顿的含有28个氨基酸残基的多肽，专业名称为胸腺肽α1，胸腺肽α1的活性比例占总胸腺肽溶液的80％左右，但是目前国家药品标准要求胸腺肽产品中的胸腺肽α1的含量比例为不低于1％，(参见：国家药品标准WS1-XG-042-2000-2003)，所以，目前国内公开的有关胸腺肽溶液的专利都是在这一标准下提出的，如：公开号：CN1390853等。由于在传统工艺中胸腺肽中活性成分含量低，仅为3％左右，相应的非活性的肽类成分多，一方面在临床应用上疗效受到一定影响，另一方面不良反应发生率也会较高，因此，利用新技术和新工艺来提高胸腺肽溶液中胸腺肽α1的含量比例就成为了一个必要的研究方向。

发明内容

本发明是要解决现有方法生产的胸腺肽溶液中胸腺肽α1的含量低的问题，提供了一种富含胸腺肽α1的胸腺肽的制备方法。

本发明一种富含胸腺肽α1的胸腺肽的制备方法，是通过以下步骤进行的：一、冷水提取：取小牛胸腺，剔除筋膜，加入1～2倍重量的0～4℃的纯化水，然后用质量百分含量为10％的盐酸调节pH值为2～3，再用匀浆器匀浆5～15min，然后在0～4℃下放置6～8h，得到提取液；二、热处理：将步骤一的提取液经水浴升温至80℃，并保温15min，然后冷却到20～30℃，再离心15min，去除固相物，收集上清液，得到离心液；三、超滤：将步骤二的离心液，用质量百分含量为10％的氢氧化钠调节pH值为7.0，用截留分子量为5000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量0～5000道尔顿的透过液，然后再用截留分子量为1000道尔顿的超滤器进行透析，保留分子量为1000～5000道尔顿的液体，得到超滤液；四、精制：将步骤三的超滤液，上离子交换层析柱，收集洗脱液，采用注射用水将洗脱液稀释至20mg/ml，得到富含胸腺肽α1的胸腺肽，经0.22μm除菌过滤后保存。

本发明在以传统工艺为基础的前提下，根据主要活性成分胸腺肽α1的等电点，用离子交换层析技术进行进一步分离，去掉一些非活性物质而获得一种富含胸腺肽α1的胸腺肽，使胸腺肽α1在胸腺肽溶液中的比例达到10％以上，远高于现行的国家标准中胸腺肽α1不得低于1％的要求。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式一种富含胸腺肽α1的胸腺肽的制备方法，是通过以下步骤进行的：一、冷水提取：取小牛胸腺，剔除筋膜，加入1～2倍重量的0～4℃的纯化水，然后用质量百分含量为10％的盐酸调节pH值为2～3，再用匀浆器匀浆5～15min，然后在0～4℃下放置6～8h，得到提取液；二、热处理：将步骤一的提取液经水浴升温至80℃，并保温15min，然后冷却到20～30℃，再离心15min，去除固相物，收集上清液，得到离心液；三、超滤：将步骤二的离心液，用质量百分含量为10％的氢氧化钠调节pH值为7.0，用截留分子量为5000道尔顿的超滤器超滤，收集分子量0～5000道尔顿的透过液，然后再用截留分子量为1000道尔顿的超滤器进行透析，保留分子量为1000～5000道尔顿的液体，得到超滤液；四、精制：将步骤三的超滤液，上离子交换层析柱，收集洗脱液，采用注射用水将洗脱液稀释至20mg/ml，得到富含胸腺肽α1的胸腺肽，经0.22μm除菌过滤后保存。

本实施方式在以传统工艺为基础的前提下，根据主要活性成分胸腺肽α1的等电点，用离子交换层析技术进行进一步分离，去掉一些非活性物质而获得一种富含胸腺肽α1的胸腺肽，使胸腺肽α1在胸腺肽溶液中的比例达到10％以上，远高于现行的国家标准中胸腺肽α1不得低于1％的要求。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤四中离子交换层析柱中的离子交换树脂采用DEAE-Sephadex-A50，平衡液为50mM pH为6.5-7.0Nacl水溶液，洗脱液为200mM pH为6.5-7.0的Nacl水溶液，280nm波长检测。其它与具体实施方式一相同。