[发明专利]鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC的用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及鸡白痢沙门菌分泌性蛋白质SpiC的用途。

背景技术

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的传染性疾病，世界各地均有发生，是危害养鸡业最严重的疾病之一。其排泄物是重要的传播媒介，同时也可通过鸡蛋垂直传播。患有鸡白痢的雏鸡表现不吃饲料，怕冷，身体蜷缩，翅膀下垂，精神沉郁或昏睡，排白色粘稠或淡黄、淡绿色稀便，肛门有时被硬结的粪块封闭，呼吸困难。成年鸡无临床症状，少数感染严重的病鸡表现精神萎靡，排黄绿色或蛋清样稀便，主要病变可见肝脏、脾脏肿大、脆弱，有坏死点，肾脏暗红充血或苍白贫血，常出现腹膜炎变化。产蛋鸡可见卵巢萎缩，卵子变性，病鸡产蛋停止。

玻板凝集实验在畜牧兽医诊断鸡白痢沙门氏菌的相关工作中有着广泛的应用，鉴于实验室诊断与临床病理变化，对鸡白痢沙门氏菌感染情况的做出相应的判断。但是相对准确性，特异性，精密性等方面，玻板凝集实验不能达到预期的效果，不能完全的达到良好的诊断目的。

应用不同的单抗标记物和检测技术，已经开发出多种方法，如反向被动血凝试验（RPH），酶免疫分析法（EIA），酶联免疫吸附法（ELISA），酶联免疫斑点法（ELISPOT），流式细胞术（FCM）分析法等。1971年建立的酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked ImmunoSorbent Assay，简称ELISA）技术具有高度的敏感性、特异性和应用广泛性，已成为近年来最吸引人的免疫检测方法之一，在疫苗的研发、临床诊断以及基础研究等方面得到广泛应用。迄今为止，尚未有针对鸡白痢沙门氏菌感染的相关免疫检测报道。

SpiC是第一个被鉴定出沙门氏菌毒力岛2编码的效应蛋白，其全长为133个氨基酸，分子量约为14kd，SpiC不含有任何保守的结构域。现有的研究表明，其在沙门氏菌得以存活于宿主吞噬细胞内起到必要性的作用。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的缺陷，提供SpiC的新用途。

本发明首先公开了鸡白痢沙门菌(Salmonella pullorum)分泌性蛋白SpiC或带融合标签的鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC在制备鸡白痢免疫检测用材料或诊断用材料中的用途。

所述鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC可直接用于制备鸡白痢免疫检测用材料或诊断用材料，或者所述鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC也可以带融合标签的鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC的形式被用于制备鸡白痢免疫检测用材料或诊断用材料。

所述带融合标签的鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC含有所述鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC，并能与鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC抗体特异性结合。所述融合标签可选自：多聚组氨酸标签、GST标签、FLAG标签，HA标签，MBP（麦芽糖结合）标签，c-Myc标签，SNAP标签等。具体的，如实施例列举的6His-SpiC，序列为SEQ ID NO:2，其表现出对鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC抗体灵敏性高、特异性好、与抗体亲和力强。

所述鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC的氨基酸序列为：

MLAVLKGIPLIQDIRAEGNSRSWIMTIDGHPARGEIFSEAFSISLFLNDLESLPKPCLAYV TLLLAAHPDVHDYAIQLTADGGWLNGYYTTSSSSELIAIEIEKHLALTCILKNVIRNHHKLYS GGV（SEQ ID NO:1）

所述鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC或带融合标签的鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC可利用常规的基因工程的方法制备，如将鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC的编码基因克隆入适当的表达载体表达并分离获得。如利用原核蛋白表达载体pET-30表达融合蛋白6His-SpiC，再采用常规的Ni亲和层析柱纯化法分离获得6His-SpiC。

进一步的，所述鸡白痢免疫检测用材料或诊断用材料为ELISA检测用材料。

本发明进一步提供了一种鸡白痢ELISA检测用材料，包括以下任一：

a)鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC和固相载体；

b)包被有鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC的固相载体。

所述固相载体可以事先包被有鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC或其融合蛋白，也可以只提供空白固相载体与鸡白痢沙门菌分泌性蛋白SpiC或其融合蛋白，在检测前由操作者自行采用常规方法在固相载体上包被特异性抗原。

所述固相载体可为各种常见规格的微量滴定板，如96孔式微量滴定板。