[发明专利]一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂及应用

说明书

技术领域

本发明涉及用于临床测定血清、血浆中糖化血清蛋白的含量的检测试剂及其应用。 

背景技术

糖化血清蛋白（也称果糖胺）是血清中各种蛋白质在高糖作用下发生的非酶促糖化反应产物，血清蛋白糖化主要发生在蛋白质分子的赖氨酸残基上，其中以白蛋白为主，血清白蛋白的的半衰期为l7-19 d，测定GSP可反映测定前2～3周的平均血糖水平，因此在糖尿病(DM)的诊断，在近期监控和疗效评价方面有较大的意义。 

目前检测GSP的方法很多，但各有利弊，如层析法操作步骤繁琐，且对设备要求高，不适合作为常规实验室的检测方法，而酶法试剂昂贵，不适合基层医院开展，NBT还原法被临床采用已经30多年了，NBT法测试血清中糖化血清蛋白含量的基本原理如下：血清果糖胺是一种大分子酮胺类化合物，在碱性条件下可将四氮唑蓝还原成紫色甲月替，其生成量与血清果糖胺成正比。用比色法在540nm（530~550nm）处，以糖化血清蛋白为校准品，测定反应中甲月替的生成量，从而得出血清果糖胺的浓度。本法具有价格低廉、结果准确快速、重复性好、可自动化批量分析、反映病情变化比糖化血红蛋白快而且费用低等优点，被临床采用已经30多年了，但是它也存在不少的问题和缺点，致实验结果不很稳定，临床评价欠佳。它主要有以下几个问题：标准的基质效应；容易受血清中还原性物质干扰；体系浑浊等。 

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂，本发明为双试剂，将NBT储存在试剂R1的中性pH环境中，试剂R2提供反应所需的碱性环境，从而解决了NBT在碱性环境中易析出，体系浑浊等问题，本发明采用新的非离子表面活性剂烷基糖苷APG1214，不仅显著改善测定的性能，而且对维护体系的透明，防止出现脂浊，效果明显，相比之前所用的Brij35、Tritonx-100、聚乙烯醇单烷醚等有更好的效果，并且显著改善了试剂的稳定性；采用生理盐水配制的人血清白蛋白（40g/L）作为基质，加入适量果糖胺纯品（Sigma）并添加防腐剂，制成糖化血清蛋白测试的液体标准品和质控品，最大程度上消除基质效应对测试造成的影响，并且使用方便。 

本发明的技术方案如下： 

一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂，其包括体积比为4:1的试剂R1、试剂R2及其对应的标准和质控血清：

所述试剂R1的组成为：

Tris-HCl缓冲液   pH=7.5，25℃              0.1mol/L

 NBT（氯化硝基氮蓝四唑）                     0.408g/L

烷基糖苷APG1214                                   5g/L

胆酸钠                                                       1g/L

尿酸酶                                                        2.5KU/L

防腐剂NaN₃                                                                     0.5g/L；

所述试剂R2的组分为：

碳酸钠缓冲液    pH=10.6，25℃                 0.4mol/L

防腐剂NaN₃                                                                      0.5g/L；

所述标准和质控血清由下列方法制备而成：

标准血清的制备：向生理盐水配制的浓度为40g/L人血清白蛋白溶液中加入果糖胺纯品并添加防腐剂、稳定剂，使果糖胺浓度为292μmol/L，其在标准血清中的浓度为1g/L；质控血清制备过程同标准血清，其靶值及允许范围为 (220-330) μmol/L，优选275μmol/L。优选的，所述防腐剂为NaN₃。

本发明同时提供了一种该试剂在检测糖化血清蛋白中的应用。