[发明专利]一种微生物发酵生产吡咯喹啉醌的方法及所用的发酵培养基

权利要求书

1.一种微生物发酵生产吡咯喹啉醌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）活化菌种：将原始菌种甲基营养菌Methylovorus sp.MP688接种到固体培养基中，在适合原始菌种生长的条件下进行培养，得活化的菌种；

（2）种子液的培养：将步骤（1）所得活化好的菌种接种到液体培养基中，在适合菌体生长的条件下进行培养，得种子培养液；

（3）发酵罐发酵：将步骤（2）所得种子培养液按比例接种到含有发酵培养基的发酵罐中；发酵培养过程中温度恒定，同时，发酵罐的pH、溶解氧和搅拌转速采用两阶段控制策略；氮源补料采用pH-氮源联控方式进行，碳源补料采用间歇补料方式进行；

（4）收获发酵液，得吡咯喹啉醌。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述培养温度为30～35℃，培养时间为2～3天；所述固体培养基为在基本培养基的基础上添加琼脂粉和碳源甲醇，所述琼脂粉在所述固定培养基中的浓度为1～2g/L，所述甲醇在所述固定培养基中的浓度为7.5～15g/L，其中，所述基本培养基的组分及配比如下：

基本培养基（以1L计）

MgSO₄·7H₂O        0.4-1g，

(NH₄)₂SO₄          3-5g，

KH₂PO₄             1.4g，

Na₂HPO₄·12H₂O     3g，

柠檬酸铁           10-30mg，

CaCl₂              10-30mg，

MnCl₂·4H₂O        5-10mg，

ZnSO₄·7H₂O        5-10mg，

CuSO₄·5H₂O        0.5-2mg，

叶酸               0.02-0.05mg，

生物素    0.02-0.05mg，

核黄素    0.02-0.05mg，

烟酸      0.02-0.05mg，

硫辛酸    0.02-0.05mg。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）具体步骤为：步骤（1）所得活化好的菌种挑单菌落，接种到5ml液体培养基中30～35℃摇床振荡，转速为200-250转/分，培养2～3天，然后取1～2ml前述菌液接种至含有100ml液体培养基的三角瓶中在相同条件下继续扩繁培养，直至得到菌株细胞密度（OD₆₀₀）为1.2～1.5的种子液；其中，所述液体培养基为在基本培养基的基础上添加碳源甲醇，所述甲醇在液体培养基中的浓度为7.5～15g/L。