[发明专利]返魂草的组织培养繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药用植物的繁育方法，特别是一种返魂草的组织培养繁育方法。

背景技术

返魂草为多年生草本植物，该植物全草入药，根及根茎可入中药，花入蒙药。具有止咳、祛痰的作用。主要分布在吉林省的长白山地区，由于近年来野生资源受到严重破坏，加之连续采收，天然资源趋于枯竭，使返魂草在面积上和产量上逐年下降。而常规的返魂草栽培手段存在着种子处理难度大、发芽率低，培育周期长的弊端。

发明内容

为了克服现有返魂草人工栽培技术中的不足，本发明提供一种返魂草组织培养的繁育方法，不仅能够提高返魂草的出苗率，而且能够缩短培育周期。

本发明所采用的技术方案是：返魂草的组织培养繁育方法，其特征是：该方法包括如下步骤：

（1）培养基制备：选择MS培养基作为基本培养基，6-苄氨基嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、赤霉素、玉米素（ZT）和3-吲哚乙酸（IAA）作为调控激素分别制备三种培养基：

初分化培养基A：MS+6-BA0.1~0.4mg/L+赤霉素1~5mg/L，

继代分化培养基B：MS+6-BA0.5~1.5mg/L+ ZT0.1~1mg/L，

生根培养基C：MS +NAA0.1~0.4mg/L+IAA0.1~0.5mg/L，

培养基A和B中均附加5%蔗糖和1%琼脂，培养基C附加4%蔗糖和0.5%琼脂，用1~2mol/L的NaOH和HCl调节pH值至6.0，并将培养基A、B和C在高压蒸汽灭菌锅0.1~0.15MPa，120~125℃灭菌15~20min；

（2）外植体的消毒：选用返魂草刚萌发的嫩叶作为外植体，用自来水冲洗30~60min，在无菌操作台上用75%酒精消毒4min，用无菌水冲洗3~4次，再用浓度为0.2%的升汞消毒7~15min，最后用无菌水冲洗3~4次；

（3）外植体的诱导：将步骤（2）消毒的返魂草外植体接种在初分化培养基A上，接种瓶内每瓶放1~3个外植体，置于培养室内培养45天，外植体长出不定芽；

（4）继代芽的分化：将步骤（3）中初分化完成的外植体转接入继代分化培养基B中，置于培养室内培养30天，外植体分化出丛芽；

（5）继代芽的生根：将高度为2.0cm左右、健壮的继代单芽转接入生根培养基C中，进行生根培养，30~40天后根长达4~5cm；

（6）炼苗及移栽：把接种瓶瓶口打开在培养室内散射光下炼苗5~7天，光照周期为16h/d，光照强度为2000~2400Lux，培养室温度为23~25℃；之后取出瓶内的组培苗，用自来水洗净根部的琼脂，再用蒸馏水稀释成500~600倍的多菌灵浸泡组培苗根部20~30min，移栽至以蛭石、珍珠岩和腐殖土为混合基质的培养杯中，将营养杯放到人工气候箱中，光照周期16h/d，光照强度为2000~2400Lux，白天23~25℃，晚上15~18℃，保持湿度40~60%，隔两周浇一次1/15~1/12MS母液，30~40天后移栽到大棚中，成活率达95%以上。

步骤（3）~步骤（5）中，培养条件为：光照周期16h/d，光照强度2000~2400Lux，培养温度23~25℃。

步骤（6）中，所述混合基质中蛭石：珍珠岩：腐殖土的质量比为2:1:3，并且该混合基质需在压力0.1~0.15MPa、温度120~125℃条件下灭菌15~20min。

1/15~1/12MS培养基母液的成分与MS培养基相同，将MS培养基母液稀释10~12倍。

本发明的有益效果：本发明利用组织培养技术在短时间内既能大规模扩大植株的繁殖量，并且使亲本的优良性状得以保存；利用组织培养进行返魂草的无性快速繁殖，取材少，培养经济；可人为控制培养条件，不受自然条件影响，跳出了植物生长环境、地域以及季节时间的限制；生长周期短，繁殖率高，能在较短的时间内繁育出大量的返魂草组培苗，缩短了返魂草的生长周期。

具体实施方式

下面结合具体实例对本发明作进一步说明。

返魂草的组织培养繁育方法，包括以下步骤：

（1）培养基制备：选择MS培养基作为基本培养基，6-苄氨基嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、赤霉素、玉米素（ZT）和3-吲哚乙酸（IAA）作为调控激素分别制备三种培养基：

初分化培养基A：MS+6-BA0.4mg/L+赤霉素3mg/L，

继代分化培养基B：MS+6-BA0.5mg/L+ ZT0.5mg/L，