[发明专利]对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012感染具有抑制作用的多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一组对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012感染具有抑制能力的多肽，还涉及编码该多肽的核酸分子、相关重组蛋白、核酸分子、表达载体和重组细胞。

背景技术

2012年，一种源自中东的新型冠状病毒HCoV-EMC 2012，已经导致了多人死亡，并且死亡率高达57%，其余患者也都患上了严重疾病。目前研究发现该新型冠状病毒HCoV-EMC 2012与SARS冠状病毒感染所用的受体不同，其受体为二肽基肽酶4（Dipeptidylpeptidase 4，DPP4），一种分布广泛的人细胞受体，从而导致该病毒对人体细胞均有广泛的感染能力。另外，新型冠状病毒HCoV-EMC 2012能够感染多种动物，包括蝙蝠和猪，使其成为持续的感染源，这也意味着该病毒有从动物传播给人类的可能。并且，目前已发现该病毒可在家庭中进行传播，暗示了其具有了人传人的能力，加上其高死亡率、未知来源及传播途径引起了全球公共健康机构的高度关注。同时，针对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012尚无有效的特异性药物，现有治疗措施仅是针对患者症状进行支持治疗。因此，急需一种针对HCoV-EMC的特异性治疗和预防性药物。

I型包膜病毒，如艾滋病病毒（HIV）、流感、SRAS冠状病毒等，其包膜糖蛋白和相应受体介导的病毒融合和进入是该类病毒感染的第一个步骤，也是最关键的步骤之一。包膜糖蛋白与受体结合后，S2蛋白N端的融合肽被暴露，使其能够插入靶细胞膜中。之后S2蛋白发生一系列构象改变，导致蛋白质成为其促进融合的状态（fusogenic state），使得病毒和靶细胞膜密切接近并促进膜融合。

进入抑制剂即是作用于病毒进入细胞阶段的药物。目前，进入抑制剂在艾滋病病毒（HIV）的治疗方面已起到重要的作用。例如，恩夫韦肽（Enfuvirtide，Fuzeon，又称T20）是美国FDA批准的国际上第一个多肽类HIV进入抑制剂，其目前被用于艾滋病的临床治疗，对那些已产生HIV逆转录酶抑制剂抗药性的病人有很好的疗效。本申请的发明人之一——姜世勃是T20前体药物（多肽637-666）的发明人（美国专利号： 5,444,044）。

进入抑制剂多来源于病毒S2蛋白的N-端序列（NHR或HR1）或C-端重复序列（CHR或HR2）。以HIV为例，其gp41的晶体学研究显示，CHR能够与NHR相互作用，形成被称作“发夹三聚体”或“六螺旋束”（6-HB）的构象，其中三个平行的NHR形成三聚体卷曲螺旋核心，三个CHR反向平行地包装成沿着内部卷曲螺旋表面的高度保守的疏水沟。源自NHR和CHR区的肽分别被称作NHR-肽和CHR-肽。大部分的CHR-肽是有效的HIV融合抑制剂，它们主要是通过与病毒gp41内部NHR三聚体结合以干扰6-HB形成而发挥作用。

发明内容

本发明的目的是提供一组对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012感染具有抑制功能的多肽片段。

本发明的另外一个目的是提供对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012感染具有抑制功能的重组蛋白，该蛋白的核心区域是本申请中所涉及的具有抑制HCov-EMC 2012病毒感染能力的多肽序列。

 

本发明经过一系列的筛选和验证确定了新型冠状病毒HCoV-EMC 2012 S蛋白的S2蛋白区域，通过同源性比较分析了S2蛋白的N-端序列（HR1）和C端序列（HR2）。根据该序列设计了针对于新型冠状病毒HCoV-EMC 2012的进入抑制剂，为进一步研发新型冠状病毒HCoV-EMC 2012的预防和治疗药物提供重要的理论及应用基础，填补了本技术领域的空白。本发明以此为理论基础。

本发明提供了一种多肽，该多肽含有如SEQ ID NO 9所示的序列并且对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012感染均具有抑制作用。

所述的多肽包括由如SEQ ID NO 9所示的多肽经过取代、缺失或添加一个或者多个氨基酸而构成并且能够抑制HCoV-EMC 病毒感染的多肽。

在本发明的一个实施例中，所述的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7或者SEQ ID NO 8所示。

上述多肽可以根据其氨基酸序列人工合成。

本发明还涉及了一组核酸分子，其编码本发明所述分离的肽。包括密码子优化衍生物。

本发明还涉及了一组表达载体，其包含本发明所述分离的核酸分子。

本发明还涉及了一组分离的重组细胞，其包含本发明所述的表达载体。

本发明还涉及了本发明所述的分离的肽、分离的核酸分子、表达载体或重组细胞作为药物的应用。