[发明专利]一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域兽用生物制品行业，涉及一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗及其制备方法。 

背景技术

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis,IB）是一种鸡群急性、高度传染性呼吸道疾病。目前疾病呈全球性分布，给各国及地区的养鸡业带来严重的危害。该疫病可引起呼吸困难、抵抗力减弱而导致雏鸡大量死亡，也会引发育成鸡和蛋鸡的肾脏和/或生殖器官病变，从而导致生长滞缓、产蛋量蛋品质下降。 

鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,IBV）可分为多种不同的血清型，目前已知的IBV血清型约有60余种，各个血清型之间不存在交叉免疫保护或仅存在微弱交叉免疫保护。不同血清型毒株间的交叉保护能力较差，因此单一血清型的IBV疫苗不能起到很好的预防作用，这已经给我国养鸡业产生了极大的危害。根据对我国多个地区进行流行病学调查和血清型的调查鉴定分析，现地目前主要流行的IBV血清型为Massachusetts和793/B血清型，国内市场现仅有的Massachusetts血清型（H52、H120等）单价疫苗，但不能有效的抵抗IB流行毒株的攻击，而经常造成免疫失败。 

发明内容

针对当前我国鸡传染性支气管炎病毒流行毒株存在多种血清型，但以Massachusetts血清型和793/B血清型为主，本发明提供一种能够同时有效预防鸡传染性支气管炎Massachusetts血清型和793/B血清型的二价活疫苗，解决目前国内现有IBV疫苗对上述两种血清型IBV毒株只能提供部分预防或甚至无任何预防效果的问题，从而更大程度上预防避免鸡传染性支气管炎的广泛发生于流行。该二价活疫苗结合Massachusetts血清型IBV弱毒H120株与本发明人自我国分离、经人工弱化处理获得的具有良好免疫原性的793/B血清型FNO-E55株制备出具有对上述两种血清型均有良好免疫原性的弱毒二价疫苗，对预防当前我国鸡传染性支气管炎疾病起到更好、更广谱的免疫保护作用，保护率可达80～100%。同时该二价疫苗在实际生产应用中可以大幅度的降低对鸡群反复免疫产生的应激反应，并且可以缩减对人力、物力等成本的消耗。 

本发明的另一个目的在于提供该鸡传染性支气管炎二价活疫苗（FNO-E55株+H120株）的制备方法。 

本发明中有以下特点： 

1.本发明涉及的鸡传染性支气管炎二价活疫苗含有鸡传染性支气管炎病毒FNO-E55株和鸡传染性支气管炎病毒H120株两种活性成分。 

2.疫苗中的鸡传染性支气管炎病毒FNO-E55株仅能够被793/B血清型鸡传染性支气管炎阳性血清中和而不能被Massachusetts血清型鸡传染性支气管炎阳性血清充分中和；鸡传染性支气管炎病毒H120株仅能够被Massachusetts血清型鸡传染性支气管炎阳性血清中和而不能被793/B血清型鸡传染性支气管炎阳性血清充分中和；鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus）FNO-E55株病毒株已于2013年03月08日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGNCC No.7310。 

3.鸡传染性支气管炎二价活疫苗的制备方法如下： 

分别将鸡传染性支气管炎病毒FNO-E55株和H120株接种于10.5日龄SPF鸡胚，病毒复制后收获含毒鸡胚尿囊液作为半成品，将以上两毒株半成品混合后，加入常用的冻干保护剂混匀、分装后进行冷冻真空干燥，即制成鸡传染性支气管炎二价活疫苗（FNO-E55株+H120株）。 

4.用该疫苗接种7日龄SPF鸡后不引起任何症状，并能够诱导靶动物产生针对793/B血清型和Massachusetts血清型鸡传染性支气管炎的特异性免疫应答。 

具体实施方式

一、菌毒种的来源及特性 

（一）鸡传染性支气管炎病毒弱毒株（FNO-E55株） 

1.病毒分离与鉴定 

2009年，本申请人由浙江某鸡场分离得到一株鸡传染性支气管炎病毒，经分子生物学试验、血清学试验等方法，鉴定为鸡传染性支气管炎病毒793/B血清型，定名为FNO-E株。 

2.鸡传染性支气管炎病毒（FNO-E株）的传代致弱