[发明专利]蝉蜕蛋白酶酶解物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药制药领域，具体涉及蝉蜕蛋白酶酶解物及其应用。

背景技术

蝉蜕为蝉科昆虫黑蚱 Cryptotympana pustulata Fabricius 的若虫羽化时脱落的皮壳。性甘，味寒，归肺、肝经。具有疏散风热，利咽，透疹，明目退翳，解痉的作用，临床主要用于风热感冒，咽痛音哑，麻疹不透，风疹瘙痒，目赤翳障，惊风抽搐，破伤风等。主要成分为甲壳质及蛋白质、氨基酸等，药材中活性成分尚不清楚，因此目前多以全粉末入药，存在着剂量大，易造成微生物污染等弊病。鉴于动物类蛋白质、粘多糖等大分子物质只有到达胃肠道后受消化酶、酸、碱等作用，方可被酶解或者水解成小分子的肽、低聚糖和其他小分子物质，吸收入血而发生药效，故生物酶仿生提取方法模拟体内消化过程，提取的有效成分治疗效果更佳。

发明内容

本发明目的是提供一种抗凝血和溶栓的蝉蜕蛋白酶酶解物及其应用。

本发明的技术内容：

蝉蜕蛋白酶酶解物，由以下方法制备：

A、净选蝉蜕，粉碎成细粉；

B、将蝉蜕细粉置于人工胃液中，然后加入胃蛋白酶水解，得到胃蛋白酶酶解液，离心，所得上清液和残渣备用；

C、取上清液，干燥，得到蝉蜕胃蛋白酶酶解物；

D、取残渣转入人工肠液中，加入胰蛋白酶水解，得到蝉蜕胰蛋白酶酶解物；

步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为蝉蜕蛋白酶酶解物。

蝉蜕蛋白酶酶解物，由以下方法制备：

A、净选蝉蜕，粉碎成细粉；

B、将蝉蜕细粉置于人工胃液中，密闭，于37℃恒温水浴30分钟后，加入3%胃蛋白酶水解3小时，得到胃蛋白酶酶解液，将胃蛋白酶酶解液置于85℃恒温水浴15分钟，冷却至室温，以4500r/min离心15分钟，所得上清液和残渣备用；

C、取上清液，干燥，得蝉蜕胃蛋白酶酶解物；

D、取残渣加入人工肠液，密闭，于45℃恒温水浴30分钟后，加入5%胰蛋白酶水解4小时，将酶解液于85℃恒温水浴15分钟，冷却至室温，以4500r/min离心15分钟，取上清液，干燥，得蝉蜕胰蛋白酶酶解物；

步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为蝉蜕蛋白酶酶解物。

蝉蜕蛋白酶酶解物，由以下方法制备：

A、净选蝉蜕，粉碎成细粉；

B、将蝉蜕细粉置于人工胃液中，蝉蜕细粉与人工胃液的重量体积比为1:20，密闭，于37℃恒温水浴30分钟后，加入3%胃蛋白酶水解3小时，得到胃蛋白酶酶解液，将胃蛋白酶酶解液置于85℃恒温水浴15分钟，冷却至室温，以4500r/min离心15分钟，所得上清液和残渣备用；

C、取上清液，干燥，得蝉蜕胃蛋白酶酶解物；

D、取残渣加入20倍量人工肠液，密闭，于45℃恒温水浴30分钟后，加入5%胰蛋白酶水解4小时，将酶解液于85℃恒温水浴15分钟，冷却至室温，以4500r/min离心15分钟，取上清液，干燥，得蝉蜕胰蛋白酶酶解物；

步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为蝉蜕蛋白酶酶解物。

所述蝉蜕胃蛋白酶酶解物或胰蛋白酶酶解物在制备抗凝血或溶栓的药物中的应用。

所述药物的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。

为了验证蝉蜕蛋白酶酶解物的抗凝血和溶栓作用，做了如下实验：

蝉蜕胃蛋白酶解产物抗凝血或溶栓活性评价：

本发明采用活化部分凝血酶时间法（APTT法）和纤维蛋白原平板法对活性成分的抗凝血和溶栓效果进行评价，评价方法如下：

1 材料

1.1　药材

蝉蜕（石家庄以岭药业股份有限公司提供），置干燥箱60℃以下干燥，粉碎成细粉，备用。

1.2试剂

牛纤维蛋白原（Sigma F8630，购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司）；胰蛋白酶1：250（Amresco0458，购自北京华美转导科技有限公司）；胃蛋白酶1：10000（Sigma P7000，购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司）；医用注射性尿激酶（购自北京市望京医院）；凝血酶（Sigma T4648，购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司）；活化部分凝血酶时间（APTT）试剂10*1.5ml（购自上海太阳生物试剂公司）；三氯乙酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；乙醇（分析纯）。