[发明专利]检测表皮生长因子受体19、21外显子突变的引物探针体系、方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测表皮生长因子受体19、21外显子突变的引物探针体系，包括如下扩增EGFR 19外显子E746～A750del突变和EGFR 21外显子L858R突变的不对称PCR引物，以及与其引物相匹配的3WJ探针：

。

2.一种检测表皮生长因子受体19、21外显子突变的方法，包括如下步骤：

（1）按常规方法进行待测样品处理；

（2）PCR扩增：以权利要求1所述的检测19 DEL的上游引物A和下游引物B形成如下不对称PCR体系扩增EGFR19外显子E746～A750del：

5×buffer                                            10微升

25毫摩的MgCl₂                                  2.5微升

10毫摩的dNTP                                   1微升

10微摩的上游引物A                            3微升

10微摩的下游引物B                           0.2微升

500个单位的Taq DNA Polymerase       0.3微升 

ddH₂O                                   33微升

总计                                     50微升

PCR扩增条件为：

以权利要求1所述的检测L 858R的上游引物A＇、下游引物B＇对应的替换上述不对称PCR体系中的上、下游引物，所形成的不对称PCR体系按同样的PCR扩增条件扩增21外显子L858R；

（3）3WJ检测：分别向上步所得两种产物中直接加入10ul相对应的探针体系浓缩液，分别形成60微升的3WJ探针体系含：

10×Buffer                              6微升

100×BSA                              0.6微升

10微摩的探针A或A＇         1.2微升

10微摩的探针B或B＇          1.2微升

ddH₂O                                     51微升

3WJ条件为：37℃孵浴20min，95℃5min终止反应检测荧光；

（4）结果判断：如有荧光产生，则存在着对应的外显子突变。

3.一种检测表皮生长因子受体19、21外显子突变的试剂盒，至少包括如下试剂：

（1）形成权利要求2所述扩增EGFR19外显子E746～A750del的不对称PCR体系所需要的2mM Mg²⁺、200nM dNtP、300nM 上游引物、30nM下游引物、Taq酶，以及形成其所对应的3WJ探针体系所需要的1×BSA、限制内切酶、探针A和探针B；

（2）形成权利要求2所述扩增21外显子L858R的不对称PCR体系所需要的2mM Mg²⁺、200nM dNtP、300nM 上游引物、30nM下游引物、Taq酶，以及形成其所对应的3WJ探针体系所需要的1×BSA、限制内切酶、探针A＇和探针B＇。