[发明专利]一种杨树花口服液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽药技术领域，尤其是一种杨树花口服液的制备方法。

背景技术

杨树花系杨柳科植物加拿大杨柳populus canadensis Mench.花序，富含黄酮、生物碱、有机酸、维生素、酚类等成分，具有健脾养胃、化湿止痢、涩肠止泻、清热解毒之功效。杨树花口服液被收载于2010版《中国兽药典》二部，临床多用于猪、羊、禽下痢。现代药理学研究表明杨树花具有抗菌、解热抗炎、止痢止泻等作用。传统杨树花口服液是通过浸泡、加热煮沸、煎煮、浓缩等方法制备而成，工艺时间长，热能消耗高、工艺用水消耗大、提取率低。每生产1吨口服液从浸泡、煎煮、浓缩、沉淀、过滤到分装前需要十几个多小时；煎煮、浓缩需要消耗热蒸汽3-5吨；药材煎煮2次，需要消耗纯化水8吨(按饮用水标准需要40吨)，浓缩需要用水10吨；有效成分黄酮含量最高为0.132%。

中药的有效成分大多储存在于细胞壁纤维素构成的框架中，被纤维素包裹在内，提取其有效成分，必须先打破其细胞壁的纤维素框架使有效成分充分溶解出来。用于中药提取研究较多的是纤维素酶，纤维素则是由β-D-葡萄糖以1，4-β葡萄糖苷键连接，用纤维素酶酶解可以破坏β-D-葡萄糖键，使植物细胞壁破坏，有利于对有效成分的提取。近年来，国内采用纤维素酶提取中药有效成分的报道不断出现。吕卫明等介绍采用酶水解法从黄芩中提取分离黄芩素达75.67%，收率为2.46%。有人在纤维素酶的作用下，从葛根中提取总黄酮，收率提高了13%。在三七提取过程中，用纤维素酶酶解作用破坏细胞壁，三七总皂昔提取率提高23.5%。此外，上海中药一厂首先应用酶法成功地制备了生脉饮口服液。与传统提取方法比较纤维素酶解法具有提高收率、节约能源，减少溶剂使用量的等优势，但至今未见采用纤维素酶解提取杨树花的报道。

发明内容

本发明提供一种杨树花口服液的制备方法，利用纤维素酶解技术提取杨树花，开发了一种提取杨树花的新工艺，大大缩短了提取时间、降低了热能耗、减小了工艺用水量，达到了节能减排、提高工作效率和提取率的目的，具有良好的社会和经济效益。

一种杨树花口服液的制备方法，包括下述步骤：

（1）将杨树花放入提取罐中，加入杨树花质量4-6倍的水，搅拌并升温至45-50℃；

（2）在提取罐中加入杨树花质量3-7%的纤维素酶，调节pH值至5.0-5.5, 45-50℃下酶解90-120min；

（3）将酶解液过滤，收集滤液，即得杨树花口服液。

步骤（2）中用10-50%的乳酸溶液或10-50%的氢氧化钠溶液调节pH值。

步骤（2）中纤维素酶的质量为杨树花质量的4%。

步骤（2）中酶解时间为120min。

其用法用量为：马、牛50～100ml；羊、猪10～20ml；兔、禽1～2ml。

酶添加量、酶解温度、酶解时间、溶剂pH值等单因素对黄酮提取率影响试验：

1、纤维素酶活性检测

纤维素酶是一种重要的生物复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。

纤维素和半纤维素构成了植物细胞壁构架，杨树花有效成分存在于有纤维素和半纤维素构成的框架内。纤维素酶具有专一性，纤维素酶分解纤维素，木聚糖酶分解半纤维素，葡聚糖酶将纤维素和半纤维素分解产物继续分解成葡萄糖。杨树花在纤维素酶和木聚糖酶作用下细胞壁充分分解释放出杨树花有效成分。

采用分光光度法测定纤维素酶和木聚糖酶活力。

检测纤维素酶中纤维素酶≥30000U/g ，木聚糖酶≥100000U/g ，β-葡聚糖酶≥120000U/g。

2、 标准溶液配制和标准曲线绘制

2.1芦丁对照品溶液的制备：

资料显示黄酮检测以芦丁为标准对照品。

准确称取芦丁对照品10mg，置于50ml容量瓶中，加30%的乙醇30ml，超声震荡使之溶解，冷却至室温，并稀释至刻度，摇匀得浓度为200μg/ml的芦丁对照品溶液，冷藏，备用。

2.2吸收波长的选择：

对照品测定波长的确定：取对照品溶液1ml，按标准曲线项下的方法进行，在400～700nm波长范围内扫描，结果在500nm波长处为最大吸收。样品测定波长的确定：取样品的乙醇提取液1ml，按标准曲线项下的方法进行，在400～700nm波长范围内扫描，结果在500nm波长处为最大吸收。

2.3标准曲线绘制：