[发明专利]PPARα-UGT通路抑制剂在治疗炎性肠疾病中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及新药研发领域，具体内容为PPARα-UGT通路抑制剂通过控制胆汁酸的稳态平衡，进而减轻炎性肠疾病的肝胆疾病并发症并且降低其向结肠癌转化风险的应用。

背景技术

UGT是定位于内质网上的二相代谢酶，它可以催化亲脂性强的糖苷配基与糖基供体葡萄糖醛酸(UDPGA)结合，从而增加亲脂性底物的极性。绝大多数化合物(内源性物质如胆汁酸、胆红素、甾体激素、生物胺类；外源性物质如食物成分、药物、环境毒素、致癌物等)的葡糖苷酸化产物是代谢失活反应，且水溶性的增加有利于其从尿和胆汁排出。已有文献报道，UGT的表达和功能受核受体PPARα的调控。因此，PPARα-UGT通路被认为是机体的一条经典的解毒途径。

炎性肠疾病(IBD)包括克罗恩病(CD)以及溃疡性结肠炎(UC)是一种与遗传、环境、免疫相关的慢性肠道疾病。10％-30％的IBD患者伴有肝胆疾病及胆汁酸内稳态紊乱，但发病机制不明。流行病学研究显示IBD与结直肠癌(CRC)的高发密切相关，溃疡性结肠炎患者罹患结直肠癌的风险高达正常人群的10倍，并且这种风险随着肠炎的病程时间及强度逐渐增高。多数IBD患者反复发作，迁延不愈，其中相当部分患者因出现并发症而需要肝移植等手术治疗。IBD病程时间长且难以根治，大部分的IBD病人需终生服用甾体抗炎药以及免疫抑制剂类的药物。但由于上述药物的选择性和特异性的限制，在治疗疾病的同时不可避免的会损伤患者的免疫防卫能力，致使患者抗感染能力下降，恶性病变的危险增加。因此，临床上急需探明IBD的发病机制，发现新的治疗靶点，研发更加安全有效的治疗药物。

胆汁酸是体内重要的内源性信号分子，介导脂质吸收、胆固醇分解、能量代谢以及炎症反应等多种生理反应。高浓度的胆汁酸长期暴露可引发细胞损伤以及肿瘤生成，故体内胆汁酸浓度需要严密监控。在胆淤病人的尿液中，胆汁酸的葡萄糖醛酸结合物可上调4到50倍不等，尿液中以葡萄糖醛酸结合物形式存在的胆汁酸占总胆汁酸的35％。据报道，UGT是胆汁酸的重要代谢形式，也是唯一的灭活方式。

基于IBD病人多患有肝胆疾病及显著增高的结肠癌发病率的临床事实，结合胆汁酸的促癌活性和被UGT代谢消除的理论基础，我们认为：PPARα-UGT-胆汁酸代谢调控网络的失衡是非可控性肠炎恶性转化及严重肝胆并发症发生的始动因素，PPARα-UGT通路亦有望成为治疗IBD及其并发症的药物研发新靶点。

发明内容

本发明的目的是研究炎性肠疾病状态下胆汁酸的失调机制并发现防止炎性肠疾病恶性转化的药物研发新靶点。首先我们通过硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导慢性结肠炎小鼠模型，研究溃疡性结肠炎能否引起PPARα-UGT通路的改变。根据qRT-PCR实验结果，DSS诱导的慢性结肠炎小鼠的小肠处的PPARα本身的mRNA表达没有发生改变，但其下游经典靶基因Acox-1以及L-Fabp均发生了显著的上调。与此相一致的是，小肠处UGT的主要亚型的表达和活性上调趋势也非常显著。通过qRT-PCR技术以及免疫组化技术进一步发现了介导胆汁酸负反馈的FXR-FGF15通路在肠炎小鼠中受到了显著的抑制，而胆汁酸合成限速酶Cyp7a1的mRNA表达和蛋白含量都有显著的上调趋势。这说明PPARα-UGT通路的激活诱发了胆汁酸合成的增加，并有可能导致毒性胆汁酸在体内的蓄积以及疾病的进一步恶化。因此，PPAR-UGT通路的抑制剂可以通过恢复胆汁酸稳态平衡进而防止炎性肠疾病的恶化以及肝胆并发症的发生。

附图说明

图1：在正常小鼠和DSS肠炎小鼠中PPARα的mRNA表达(a)；A cox1的mRNA表达(b)；L-Fabp的mRNA表达(c)

图2：在正常小鼠和DSS肠炎小鼠中UGT各亚型的mRNA表达(a)及功能活性(b)

图3：在正常小鼠和DSS肠炎小鼠中FXR和FGF15的mRNA表达(a)及免疫组化分析(b)

图4：在正常小鼠和DSS肠炎小鼠中胆汁酸合成限速酶的mRNA表达(a)及蛋白含量(b)

具体实施方式

实施例1.DSS诱导的慢性结肠炎症小鼠模型的复制

实验材料：SPF级雄性C57BL/6小鼠20g(8周龄)，由军事医学科学院实验动物中心提供；

硫酸葡聚糖(DSS，36000-50000)购自MP公司。

实验方法：

1.实验鼠需在标准化动物房环境中适应至少7天，给予标准动物饲料，饮用高压灭菌水，并及时更换垫料(每周2-3次)。