[发明专利]用于扩增流感病毒的非致瘤性MDCK细胞系及其筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及MDCK衍生细胞系，更具体来说，涉及一种用于扩增流感病毒的非致瘤性MDCK细胞系及其筛选方法。

背景技术

每年的流感流行无论对发达国家还是发展中国家，都会带来比较大的影响。据统计，在流感盛行的季节，全世界每年约5-15%的人会发生上呼吸道感染，约250，000-500，000的人会发生死亡[WHO. Influenza Fact Sheet www.who.int/mediacentre/factsheets/fs211/en/]。接种流感疫苗是预防和控制流感的主要措施之一，能显著降低发病率和死亡率，所以有效、快速地提供疫苗就显得尤为重要。目前，大多数流感疫苗仍然采用鸡胚来生产WHO公布的毒株，由于在流感盛行的季节，可能存在鸡胚供应的短缺，从而无法快速应对大规模爆发的流感。考虑到鸡胚供应的不确定性和可能存在潜在的禽流感病毒，故在1995年，WHO建议采用更好的病毒扩增方式来代替鸡胚生产疫苗，他们首推哺乳细胞培养体系[WHO. Cell culture as a substrate for the production of influenza vaccines:memorandum from a WHO metting. Bull. World Helath Organ. 73(4), 431-435(1995)]。用细胞生产疫苗来应对突然爆发的流感，可以在短时间内规模化生产，免疫疫苗供应链的短缺，也可以解决一部人对鸡蛋过敏的问题。

近年来，一些连续性的细胞系逐渐被用来生产流感疫苗，其中MDCK、 Vero及PER.C6 [Alexander Doroshenko and Scott A Halperin. Trivalent MDCK Cell culture-derived influenza vaccine Optaflu?? (Novartis Vaccine). Expert Rev. Vaccines 8(6), 679-688(2009)] 细胞扩增流感病毒的滴度较高，故成为生产流感病毒的主要细胞株。苏威制药、巴克斯特、DynPort、Crucell、诺华、葛兰素史克及MedImmune等公司先后进行了用这其中一种细胞来生产流感疫苗的研究。其中，以MDCK细胞的研发成果最为丰硕，先是在2001年苏威制药采用MDCK来生产的流感病毒裂解灭活苗获得审批，后来由于生产商的原因无法规模化上市，到了2007年，诺华基于MDCK细胞生产的流感疫苗Optaflu得到欧洲药品评价局的批准，成功上市。MedImmune 公司研发的三价FluMist??在2003年得到了FDA的批准，但由于该药物采用冷冻制剂，不利于运输，故无法上市。后来他们对配方进行了改变，变成冷藏运输， 使得该三价疫苗于2007年1月份得到FDA的批准[MedImmune, Inc. http://pressroom.medimmune.com/press-releases/2007/01/08/fda-approves-medimmune-s-refrigerated-formulation-of-flumist-r/]，随后MedImmune 公司继续致力该疫苗的研发，于2012年2月得到FDA批准，生产首支四价的流感疫苗[MedImmune,Inc. http://pressroom.medimmune.com/press-releases/2012/02/29/

medimmune-announces-fda-approval-of-flumist%C2%AE-quadrivalent-influenza-vaccine-live-intranasal/]。

MDCK细胞被用于制造流感病毒疫苗，具有以下几个优势：首先是病毒生长的优势，在MDCK细胞中能扩增出滴度较高的流感病毒 [Gaush & Smith , 1968; Govorkova et al., 1999]；其次，该工艺容易快速放大；第三是可以追溯和全面鉴定该细胞；第四该细胞可以驯化成无血清培养。当然，除此之外，可能还有一些更多的优点导致厂商喜欢用这个细胞来生产流感疫苗。