[发明专利]基于移动反应界面电泳的高通量蛋白质滴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种电化学方法分析材料的方法，具体是一种用于生物样品中蛋白质含量检测的基于移动反应界面（moving reaction boundary,MRB）电泳的高通量蛋白质滴定方法。

背景技术

蛋白质是食品（如牛奶）中的主要营养成分之一。检测食品中蛋白总含量对于衡量食品营养价值、判定商品价格、评定食材质量等方面有很大的意义(Moore,J.C.,DeVries,J.W.,Lipp,M.,Griffiths,J.C.,Abernethy,D.R.,2010,Comper.Rev.FoodSci.Food Saf.,9,330-357.)。并且蛋白质含量分析在临床医学诊断中具有重要应用（康熙熊，临床电泳，人民卫生出版社，2006年）。凯氏定氮法已成为各种生物样品蛋白含量标准方法之一（Kjeldahl,J.Z.,1883,Anal.Chem.,22,366-382.），其他方法还有Dumas法(Thudichum,J.L. W.,Wanklyn,J.A.,1869,J.Chem.Soc.,22,277-292.)、染料结合法(Colenbrander,V.F.,Martin,T.G..1971,J.DairySci.,54,531-533)、光谱法(Kennedy,J.F.,White,C.A.,Browne,A.,1985,J.FoodChem.,18,95-112.)等。其中凯氏定氮法和Dumas法都容易受非蛋白氮（non protein nitrogen,NPN）的影响。许多不法分子在食品中添加NPN（如三聚氰胺、尿素），如若用凯氏定氮法或Dumas法检测已添加NPN的食品的蛋白质含量，会导致测得结果比实际值高(Moore,J.C.,DeVries,J.W.,Lipp,M.,Griffiths,J.C.,Abernethy,D.R.,2010,Comper.Rev.Food Sci.Food Saf.,9,330-357.)。而三聚氰胺的过多摄入会引起肾结石、血尿，最后导致急性肾功能衰竭(Lam,C.W.,Lan,L.,Che,X.,Tam,S.,Wong,S.S.Y.,Chen,Y.,Jin,J.,Tao,S.H.,Tang,X.M.,Yuen,K.Y.,2009,Clin.Chim.Acta,402,150-155.)。尿素的添加会降低食品营养价值，甚至影响人类身体健康(Trivedi,U.,Lakshminarayana,D.,Kothari,I.,Patel,N.,Kapse,H.,Makhija,K.,Patel,P.,Panchal,C.,2009,Sensor Actuator.B-Chem.,140,260-266.)。因此，有必要提出一种既可以准确测定蛋白含量，又不受NPN影响的测定食品等样品中蛋白含量的可靠方法。

目前已经有一些分析方法可以减少NPN的影响，测定复杂样品中的某种特定的蛋白质，如亲和色谱法(Goshe,M.B.,Conrads,T.P.,Panisko,E.A.,Angell,N.H.,Veenstra,T.D.,Smith,R.D.,2001,Anal.Chem.,73,2578-2586.)、亲和毛细管电泳法(Armenta,J.M.,Gu,B.,Humble,P.H.,Thulin,C.D.,Lee,M.L.,2005,J.Chromatogr.A,1097,171-178.)、生物传感器(Setford,S.J.,White,S.F.,Bolbot,J.A.,2002,Biosens.Bioelectron.,17,79-86.)等。尽管这些方法可以排除NPN的影响，但它们的专一性导致只能测定样品中的一种或几种蛋白质，但对总蛋白含量的准确度不是很高。除此之外，这些方法往往需要昂贵的仪器设备，操作复杂，测定时间较长。