[发明专利]特异性检测转基因番茄品系华番1号的标准分子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种特异性检测转基因番茄品系华番1号的标准分子及其应用。

背景技术

近年来，转基因技术广泛应用在农业生产中。华番1号就是利用转基因技术将乙烯形成酶（EFE）反义基因导入到番茄中获得耐贮藏的番茄品系，进一步与另一番茄品系（A53）杂交而获得的。从1996～2001年，华番一号番茄已在湖北、广西、贵州、新疆、江苏等21个省市大面积推广应用，累计推广面积25余万亩，累计新增利润3.75亿元，新增税收7499.4万元。

在转基因检测时，必须使用标准物质作为阳性对照或制作标准曲线，以对转基因产品进行准确检测。标准质粒分子是近几年发展起来的一种可替代植物基因组的一种重组质粒分子，一般包括物种特异性片段和转基因作物检测的外源基因或品系特异性片段。优点是生产成本低，质粒DNA的纯度高，产量大，制作和应用更为灵活，可以人为设计携带多个外源基因，使其应用更为广泛。目前，已经成功应用于转基因大豆棉花和玉米等的定量检测，而且目前标准质粒分子已经获得了国际协同认证。

目前尚未有针对转基因番茄品系华番1号进行特异性检测的质粒标准分子的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性检测转基因番茄品系华番1号的标准分子及其应用。

本发明所提供的特异性检测转基因番茄品系华番1号的标准分子具体为环状载体。所述环状载体具体包括乙烯形成酶反义基因（anti-EFE基因）片段、番茄内源基因Lat52片段，以及Ti质粒T-DNA的边界序列（如右边界序列RB）片段。

在本发明中，所述乙烯形成酶反义基因片段的序列具体可如序列表中序列1的第1-87位所示；

所述番茄内源基因Lat52片段的序列具体可如序列表中序列1的第94-185位所示；

所述Ti质粒T-DNA的边界序列片段的序列具体可如序列表中序列1的第192-299位所示。

进一步，所述环状载体为将所述乙烯形成酶反义基因片段、所述番茄内源基因Lat52片段、所述Ti质粒T-DNA的边界序列片段一同与pEASY-T3质粒相连后得到的重组载体。

更加具体的，所述环状载体为将如序列表中序列1所示的DNA片段与所述pEASY-T3质粒连接所得的重组载体。

所述环状载体在作为标准分子检测转基因番茄品系华番1号中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种定性或定量检测转基因番茄品系华番1号的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒，具体包括所述环状载体和如下（a1）-（a3）中的全部或部分：

（a1）由序列表中序列2和序列3所示单链DNA组成的引物对，以及核苷酸序列如序列表中序列4所示的探针；（用于扩增anti-EFE基因片段）

（a2）由序列表中序列5和序列6所示单链DNA组成的引物对，以及核苷酸序列如序列表中序列7所示的探针；（用于扩增番茄内源基因Lat52片段）

（a3）由序列表中序列8和序列9所示单链DNA组成的引物对，以及核苷酸序列如序列表中序列10所示的探针。（用于扩增RB片段）

以上（a1）-（a3）中，所述探针可为TaqMan荧光探针。TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，报告荧光基团连接在探针的5’末端，淬灭荧光基团连接在探针的3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

所述报告荧光基团可为Fam（FAM）、Hex(HEX)、Tet(TET)、Joe(JOE)、Vic(VIC)、Fite(FITE)、Cy3(CY3)或Cy5(CY5)。所述淬灭荧光基团可为Tamra（TAMRA）、Rox(ROX)、Dabcy(DABCY)、Bhq1(BHQ1)或Bhq2(BHQ2)。在本发明中，所述探针5’端标记的报告荧光基团具体为FAM荧光基团，3’端标记的淬灭荧光基团具体为TAMRA荧光基团。

所述试剂盒在作为标准体系检测转基因番茄品系华番1号中的应用也属于本发明的保护范围。

制备所述试剂盒的方法也属于本发明的保护范围。