[发明专利]一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法。 

背景技术

小花蜘蛛抱蛋,为百合科植物小花蜘蛛抱蛋（Aspidistra minutiflora Stapf in Journ.Linn.）。多年生常绿草本，根状茎直径约6毫米，具密节和鳞片。分布于我国亚热带地区广西、广东和贵州三省，以广西分布最多。生于路旁或山腰之花岗岩或石灰岩上。辛、苦，寒。肺、肝二经。有清热止咳，续伤接骨的功效。可用于痰热咳嗽，用于跌扑闪挫，金疮，损伤溺骨等证。 

小花蜘蛛抱蛋花色褐紫色或淡绿色，具有较高的园林观赏和一定的药用价值，近年来其资源遭到了严重破坏，且对生长环境要求十分苛刻，一般仅正常出现在保存较好的原生林内，对群落植物、光线、湿度、土壤和地被层均有不同程度的特殊要求。随着市场需求量的不断增加，野生小花蜘蛛抱蛋资源濒临枯竭了，生产上难以实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高小花蜘蛛抱蛋种苗的繁殖速度和质量，实现小花蜘蛛抱蛋优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。 

发明内容

本发明的目的是提供一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良小花蜘蛛抱蛋种苗。 

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： 

（1）外植体的选择与消毒：取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水， 

（2）侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下 培养30天，侧芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的6-BA、1.0-2.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 

（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 

（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23-26°C，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8， 

（5）炼苗与移栽：步骤（4）获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时的温度条件为20-28°C，相对湿度75-80%，遮阳率为70%。 

本发明的突出优点在于： 

（1）本发明通过生物技术对小花蜘蛛抱蛋进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的小花蜘蛛抱蛋幼苗，显著提高了小花蜘蛛抱蛋种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。 

（2）在MS繁殖培养基中添加1.0-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA和0.1-0.4mg/L的激动素KT可促进丛生芽的分化；添加浓度为0.5-1.5mg/L的生长激素萘乙酸NAA可促进丛生芽的生长； 

在MS壮苗培养基中添加浓度为1.5mg/L的6-BA和0.2-0.6mg/L的吲哚乙酸IAA可促进丛生芽叶片的展开； 

在MS生根培养基上组合使用浓度为2.0mg/L的吲哚丁酸IBA和1.0mg/L的生长素IAA，可获得带根的完整植株，这些植株经炼苗后可直接移栽沙床。