[发明专利]一种测定三聚氰胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定三聚氰胺的方法，特别是能量转移荧光光谱法测定三聚氰胺的方法。

背景技术

三聚氰胺是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化合物，常用作化工原料，不可用于食品加工或食品添加物。中国自2008年三鹿奶粉事件发生后，国家规定：液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。因此研究建立一种快速、准确、成本低廉的测定牛奶中三聚氰胺含量的新方法具有重要的意义。目前，三聚氰胺的测定方法主要是高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等。但是这些方法所用仪器昂贵，不易推广。荧光光谱法具有分析速度快、操作简便、分析精度高等优点，在实际分析中应用广泛。曙红Y-中性红作为能量转移体系，已应用于蛋白质的测定，但利用该能量转移体系采用荧光光谱法测定三聚氰胺，尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于曙红Y-中性红能量转移的测定三聚氰胺的荧光光谱法。

具体步骤为：

    （1）于6支10mL比色管中依次加入0.0、0.07、1.0、2.0、3.0、5.0 mL 0.1～0.5g/L的三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分别加入1.0～2.5 mL 4.0×10^-6mol/L的曙红Y(EY)溶液、0.5～1.0mL 2.0×10^-4mol/L的中性红(NR)溶液和0.3～1.0mL pH3.5的伯瑞坦-罗比森（Britton-Robinson，B-R）缓冲溶液，以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白，然后用超纯水将6支比色管定容至刻度，摇匀，在30℃的恒温水浴中反应30 min后，于荧光光度计上，用1cm石英比色皿，以520nm为激发波长，在538nm处分别测定含三聚氰胺溶液的荧光值F_538nm和试剂空白的荧光值F₀，计算荧光值差值ΔF_538nm = F_538nm–F₀值, 其荧光值差值ΔF_538nm与三聚氰胺质量浓度ρ在1.4～100mg/L范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔF_538nm=0.7736ρ+ 17.33，相关系数r=0.9992，检出限为1.1mg/L。

（2）取牛奶30 mL，加入20.0 mL 质量百分比浓度为1%的三氯乙酸溶液和8.0 mL质量百分比浓度为2%的乙酸铅溶液，超声20 min。然后取部分溶液于离心管中，离心10 min，取上清液作为待测液。

（3）取步骤（2）处理后的牛奶待测液1mL，依步骤（1）的方法测定荧光值，计算出牛奶中三聚氰胺的含量。

本发明方法简便、快捷。

附图说明

图1为本发明实施例空白与20 mg/L三聚氰胺(MEL)的荧光光谱图。

图中标记a：试剂空白；b：4.0×10^-6 mol/L EY - 2.0×10^-4 mol/L NR - pH3.5 B-R - 20 mg/L MEL。

具体实施方式

实施例：