[发明专利]全人源的抗人血管内皮生长因子受体2胞外区的单链抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种新的可与人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)胞外区特异结合的高亲和力全人源单链抗体，能抑制VEGFR的活化，从而抑制高表达VEGFR的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的生长，是一种具有抗肿瘤活性的基因工程抗体。

背景技术

以新生血管为靶点对肿瘤进行生物治疗成为新的研究热点，其优势主要表现在：肿瘤血管内皮细胞是药物经静脉途径首先到达的部位、不易产生耐药性、肿瘤血管内肿瘤血管内皮细胞的有限损害就可造成大量肿瘤细胞的生长抑制、抗肿瘤血管治疗具有一定的广谱性等。目前，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是迄今鉴定出来的最重要的血管生成因子，可作为肿瘤代谢及转移的标记。血管内皮生长因子受体(VEGFR)是VEGF的特异性受体，通过与相应的VEGF结合刺激血管内皮细胞增殖、迁移、促进新生血管的生成，与机体多种常见肿瘤的发病及肿瘤的转移有着密切的关系。

最近，以VEGF/VEGFR作为靶标的抗肿瘤药物的研发取得了很大的进展，已有数种上市进入临床试验。针对VEGF/VEGFR信号传导途径研发的抗肿瘤药物包括中和VEGF/VEGFR的抗体(如贝伐单抗、IMC21121B)、可溶的VEGFR类蛋白(VEGF-Trap)和酪氨酸激酶抑制剂(索拉非尼、舒尼替尼)等，其中VEGF的人源化抗体贝伐单抗是第一个被美国FDA批准上市的抗血管生成药物。

目前发现的VEGFRs主要有5种类型，有3种属于酪氨酸激酶受体，分别是VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2(kinase insert domain-containing receptor，KDR/Flk-1)和VEGFR-3(Flt-4)。VEGFR2(人VEGFR2称为KDR)作为VEGF的主要受体之一，在介导VEGF的内皮细胞增殖、迁移、分化、微管形成、血管通透性增加等一系列生物活性中发挥重要作用。

单克隆抗体根据其序列来源的不同分为鼠源抗体，嵌合抗体(小鼠的可变区和人的恒定区)，人源化抗体(人和鼠的互补性决定区)，人源抗体。鼠源抗体经临床多次用药后，人体内易产生抗鼠抗体，使其临床疗效减弱或消失，而人源抗体可以降低抗体药物在人体的免疫原性，因此2000年以来人源抗体得到了长足的发展。2004年，美国FDA批准的抗VEGF抗体贝伐单抗(Avastin)在临床与化疗药物联合治疗结肠直肠癌有明显的延长病人生命的效果。然而，封闭VEGF治疗肿瘤的同时也抑制了VEGF的正常生理功能，病人使用后会引起高血压、出血和血栓形成。因此，靶向VEGFR2的全人源抗体能降低免疫原性，而且特异性拮抗VEGFR的抗体相对于拮抗VEGF而言其特异性及针对性更强，并能避免对VEGF的全面封闭所产生的副作用。另外分子量只有全长抗体的1/6的抗VEGFR2单链抗体可以通过E.coli发酵降低生产成本。

发明内容

发明目的

本发明提供一种具有潜在医学和药学价值的全人源抗人VEGFR2胞外区的单链抗体。本发明单链抗体的特征为特异性结合人VEGFR2胞外区，在体外能够抑制人脐静脉内皮细胞HUVEC的生长。

技术方案

一种全人源的抗人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)胞外区的单链抗体，其特征在于：

抗VEGFR2胞外区的单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，并且重链可变和轻链可变区通过柔性肽连接，重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1；轻链可变区为SEQ ID NO：2的氨基酸序列，柔性肽的氨基酸序列为SGGGGSGGGGSGGS，SEQ ID NO：9。

所述的抗VEGFR2胞外区的单链抗体，具有重链CDR3域，该域包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，或通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列；所述的抗VEGFR2胞外区的单链抗体，具有轻链CDR3域，该域包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列，或通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列。

所述的抗VEGFR2胞外区的单链抗体具有重链CDR2域，该域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，或通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列；所述的抗VEGFR2胞外区的单链抗体具有轻链CDR2域，该域包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，或通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列。