[发明专利]一种鉴定水稻和陆稻的方法

权利要求书

1.一种鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，包括如下步骤：从水稻植株的组织或器官提取DNA样品，对DNA样品进行聚合酶链（PCR）扩增，对PCR产物进行电泳检测，利用分析软件读取PCR产物片段大小，确定PCR产物的基因型，对PCR基因型进行赋值，计算综合鉴定值，根据综合鉴定值的大小，确定水稻或陆稻的生态型。

2.根据权利要求1所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述水稻植株的组织或器官包含有水稻的种子、幼苗、成株、茎、叶。

3.根据权利要求1所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述的聚合酶链（PCR）扩增体系为三引物PCR体系。

4.根据权利要求3所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述三引物PCR体系中每组引物包含三条序列，所述三条序列包括一对SSR特异性引物和一条M13通用引物。

5.根据权利要求4所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述一条M13通用引物5’端荧光标记。

6.根据权利要求4所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述一对SSR特异性引物中退火温度较高的一条引物5’端连接一段M13序列。

7.根据权利要求6所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述M13序列为CACGACGTTGTAAAACGAC。

8.根据权利要求3所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述的聚合酶链（PCR）扩增体系的反应条件（20ul体系）为

1) 10×Taq缓冲液(含25mM MgCl2)           2μl 

2) 10mM dNTP Mixture                                0.4μl 

3) 20μM 引物1                                          0.2μl 

4) 20μM 后引物2（含M13序列）            0.04μl

5) 20μM 荧光标记M13引物                     0.16μl

6) Taq DNA Polymerase                                 1Unit

7) DNA模板                                                 20-30ng 

8) ddH2O(双蒸水)                                         补足至20μl 。

9.根据权利要求8所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述的聚合酶链（PCR）扩增体系的反应程序（20ul体系）为： 

1) 94℃预变性5分钟；

2) 94℃变性40秒；

3) 退火温度：55-57.5℃，退火时间：30秒； 

4) 72℃延伸40秒 ；

5) 循环2)、3)、4) 步骤，共34个循环 

6) 72℃延伸10分钟。

10.根据权利要求1所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述电泳检测为荧光毛细管电泳。

11.根据权利要求1所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述电泳检测为聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

12.根据权利要求1所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述基因型为5对长度为13-40bp的寡聚核苷酸及其衍生物序列的SSR引物，所述5对SSR引物遗传信息如表1所示：

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13.根据权利要求1或12所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于，所述5个SSR

位点各不同基因型的水稻、陆稻鉴定值的信息如表2所示：

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14.根据权利要求13所述的鉴定水稻和陆稻的方法，其特征在于， 综合所述鉴定值的大小，确定水稻或陆稻的生态型的依据如表3所示:

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