[发明专利]利用分子印迹电化学传感器检测微量赤霉素A3的方法

权利要求书

1.一种利用分子印迹电化学传感器检测微量赤霉素A3的方法，其特征在于具体步骤如下：

（1）金电极的处理：

将金电极依次用1.0 μm、0.3 μm和0.05 μm氧化铝粉进行表面抛光处理，然后依次在体积百分比浓度为50%的硝酸和无水乙醇中各浸泡洗涤5 min，取出后在纯水中超声洗涤5 min，然后在0.5 mol/L H₂SO₄中于-0.2～1.0 V进行电化学处理，直到获得稳定的循环伏安曲线；

（2）赤霉素A3分子印迹电化学传感器的制备：

将步骤（1）处理干净的金电极置于含1.0×10^-3 ～ 2.0×10^-3 mol/L邻苯二胺、5×10^-4 mol/L GA3的混合溶液中，在0V～0.8V间于50 mV/s的扫描速率用循环伏安法扫描30圈；取出金电极并用二次蒸馏水冲洗干净后静置晾干；再将金电极放入体积比为8:1的无水甲醇-冰乙酸体系中，在搅拌下洗涤金电极表面的聚合膜3 min，用蒸馏水冲洗干净后静置3 ～ 5 min,然后把金电极浸入赤霉素A3的过饱和水溶液中10～30 min，以便赤霉素A3分子能够掩蔽所有的在洗脱步骤中形成的分子印迹孔穴；然后在10^-3 mol/L功能化树枝状大分子标记的赤霉素溶液中孵化5～30 min，从而制成赤霉素A3分子印迹电化学传感器；

（3）检测方法：

在小烧杯中加入含1.0×10^-3 mol/L过氧化氢、5.0×10^-3 mol/L对苯二酚以及0.5 mol/L氯化钾的0.05 mol/L、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液10 mL作为检测体系；将步骤（2）孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学传感器放入3×10^-7～6×10^-9 mol/L浓度范围内的赤霉素A3标准溶液中进行竞争吸附，10 ～30 min后接入检测体系，选用电化学工作站进行差分脉冲伏安法扫描，扫描电压-0.5～0.3 V；

（4）标准工作曲线的绘制：

在15 mL小烧杯中加入10 mL含1.0×10^-3 mol/L过氧化氢、5.0×10^-3 mol/L对苯二酚以及0.5 mol/L氯化钾的0.05 mol/L、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液；将已在功能化树枝状大分子标记的赤霉素A3溶液中孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学传感器浸入10 mL赤霉素A3标准溶液中竞争吸附，15 min后接入检测体系进行差分脉冲伏安检测；赤霉素A3在3×10^-7 mol/L～6×10^-9 mol/L浓度范围内与还原峰电流值?I_{呈良好的线性关系：?I(10^-6A)= 16.64 + 1.82C (10^-8 mol/L) ，线性相关系数r = 0.9928；}

（5）待测样中赤霉素A3含量的测定：

在15 mL小烧杯中加入10 mL含1.0×10^-3 mol/L过氧化氢、5.0×10^-3 mol/L对苯二酚以及0.5 mol/L氯化钾的0.05 mol/L、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液；将孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学传感器浸入10 mL赤霉素A3待测样品溶液中竞争吸附，15 min后接入检测体系进行差分脉冲伏安扫描，扫描电压-0.5 ～0.3 V，得到峰电流值i；最后根据校正曲线计算出赤霉素A3的浓度C。