[发明专利]一种白及多倍体植株的培育方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种白及多倍体植株的培育方法。

（二）背景技术

白及为兰科植物白及（Bletilla sfriata(Thunb.)Reiehb.f.）的干燥块茎，具有收敛止血，消肿生肌等功效，用于治疗咯血，吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂等症。白及不仅药用价值高，而且极具观赏价值，是我国现代医药工业和化妆品工业的重要原材料。近年来，随着我国中医药事业的发展，白及在临床上的应用范围不断扩大，白及的用药需求急剧增加。但白及种子非常细小且无胚乳，因此在自然条件下很难萌发和生长，实生苗的栽培较为困难，仅靠分株繁殖，而白及分株繁殖周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，很难满足大量栽培的需要。白及正面临着资源难以满足市场的严峻现实。

白及种质的好坏是影响白及产量重要的因素。因此，加强白及优良品种的选育至关重要。多倍体植物在自然界中是普遍存在的，由于它们在生理上较普通植物有更强的适应性和遗传上有较大的可塑性，使得育种学家自20世纪30年代开始就热衷于多倍体诱导育种的研究。目前多倍体诱导育种工作在农作物、果树、蔬菜、花卉等领域广泛开展，取得了很好的成绩，如目前多倍体马铃薯、西瓜等都已经投入到生产应用中，已经带来了巨大的经济效益和社会效益。药用植物多倍体育种工作开展得也比较早，自从1937年布莱克斯里用秋水仙素处理曼佗罗获得多倍体，半个多世纪以来，育种学家对多种药用植物进行了多倍体育种的研究，培育了许多高产优质新品种，现今，已在卷叶贝母、青蒿、金银花、罗勒、丹参、紫锥菊、黄芪等药用植物上诱导成功。药用植物多倍体具有以下的优点：

1.生物产量提高

药用植物大多以收获根、茎、叶等营养器官为主，具有巨大性的特点，药用植物可以利用其优势来提高药材产量。川黄柏同源四倍体较原植物叶子宽大而厚实,茎杆粗壮；四倍体决明种子比二倍体决明种子增重70%；S.Amiri等研就表明多倍体曼陀罗叶片宽大，植株干重、叶绿素含量较原植物高。

2.抗逆性提高

多数的多倍体对外界环境条件具有较强的适应性，多倍体植株茎秆粗壮故能较好的抗倒伏有的还有抗旱、抗病、抗寒等特性。例如张笑艺对不同倍性的盾叶薯蓣进行高温抗性研究，测定叶片内与高温胁迫相关的各项生理指标，表明四倍体盾叶薯蓣对高温胁迫具有更好的耐受性。

3.药用活性成分含量高

药用植物的多倍体育种一方面要提高产量，另一方面应使药用植物内的化学药效成分含量明显增加，并且可增添新的药效成分。例如，有研究表现盾叶薯蓣的同源四倍体中有效成分薯蓣皂苷的含量比原植物高1.2倍左右；

随着生物技术的发展，药用植物的多倍体育种工作也取得了较大的进展，获得了一些多倍体新品种，以其速生、优质、高抗逆性等特性在生产上取得了较好效果。药用植物多倍体育种拓宽了种质资源，防止了由于长期的栽培而导致的药用植物品种退化。可以预见，生物技术在中药材品种改良方面具有很好的应用前景，将随着人类对其应用价值认识的提高，以及有关新技术方法的应用，从而带动未来药用植物的可持续、高效发展。

（三）发明内容

本发明目的提供一种白及多倍体植株的制备方法，利用该方法可以获得具有四倍体特征的白及植株，且操作简单，适合规模化生产。

本发明采用的技术方案是：

一种白及多倍体植株的培育方法，所述方法包括：

（1）将消毒后的白及种子抖入秋水仙素溶液中，黑暗条件下培养6～8d后，离心、洗涤去除秋水仙素；所述秋水仙素溶液中秋水仙素浓度为0.1～0.4%（w/w），pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液，其中还可添加0.1mg/L-1.0mg/L的6-苄氨基嘌呤；白及种子可直接对蒴果进行消毒，也可将蒴果中的种子取出后进行消毒；

（2）将秋水仙素处理过的白及种子转接到白及种子萌发培养基中，先于培养箱中黑暗条件下培养5～6d，再移至培养室，培养温度23～27℃，光照度2000～2500lx，光照12h/d，培养三个月得到多倍体白及幼苗；所述白及种子萌发培养基组成如下：1-萘乙酸0.2～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；

（3）将上述培养得到的白及幼苗，挑选出茎变粗、叶片加厚、叶色加深的植株，转接到白及增殖培养基中进行稳定扩繁，选取2～3代性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；所述白及增殖培养基组成如下：6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L，1-萘乙酸0.1～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；