[发明专利]猪副嗜血杆菌快速检测试纸条

说明书

一、技术领域

本发明是一种涉及猪副嗜血杆菌的检测试剂显示器具，特别是涉及一种可检测猪副嗜血杆菌的检测试纸条。

二、技术背景

猪副嗜血杆菌病(haemophilus parasuis)又称格氏病、纤维素性浆膜炎和关节炎，是由猪副嗜血杆菌引起猪的多发性浆膜炎和关节炎的统称?。猪副嗜血杆菌可以影响从2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶后和保育阶段发病，通常见于5-8周龄的猪，发病率一般在l0％～l5％，严重时死亡率可达50％。主要临床症状表现为咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行和被毛粗乱；主要剖检病变表现为纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等。此外，猪副嗜血杆菌还可引起败血症，并且在急性感染后可能留下后遗症，即母猪流产、公猪慢性跛行。

猪副嗜血杆菌只感染猪，有很强的宿主特异性。该病主要通过空气、猪与猪之间的接触或通过污染排泄物进行传播。病猪和带菌猪是该病主要传染源。有些病原体可促进猪副嗜血杆菌的感染，如猪圆环病毒、猪蓝耳病病毒、猪流感病毒、伪狂犬病毒、呼吸道冠状病毒、肺炎支原体等都可促进或加重猪副嗜血杆菌的感染，而猪副嗜血杆菌的存在也会加剧原发病的临床表现。该病常与PRRS并发，在猪群中存在PRRS感染时，猪副嗜血杆菌的分离率会增加，由猪副嗜血杆菌导致的死亡率也大幅度增加。

主要剖检病变表现为,慢性型病例最特殊的病理变化是纤维性化脓性支气管肺炎，兼有纤维性胸膜炎。病灶往往出现在肺脏背部，呈圆形，有明显的界限。肺部早期组织学病变包括坏死、出血，嗜中性白细胞浸润，巨嗜细胞和血小板激活，血管内血栓形成；后期则主要以巨嗜细胞浸润为特征。急性型病例的特征性病变是浆液性纤维蛋白性多发性浆膜炎和多发性关节炎。主要表现为胸膜炎、腹膜炎、脑膜炎、心包炎、关节炎。通常在肺的横隔膜叶较易出现病灶，全身淋巴结肿大，暗红色，切面呈大理石花纹；肾、十二指肠均有出血点，回盲口附近有轮层扣状溃疡；脾出血性梗死。

对猪副嗜血杆菌的检测主要通过细菌分离鉴定、琼脂扩散试验、补体结合试验，对该病的诊断主要通过细菌分离鉴定、间接血凝抑制试验、琼脂扩散试验、补体结合试验 。目前，采用猪副嗜血杆菌全菌体作为包被抗原，建立了检测猪副嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。聚合酶链式反应(PCR)技术，该方法具有高灵敏度、高特异性等优点，PCR检测方法已被广泛运用于猪副嗜血杆菌的鉴定和流行病学调查。

上述检测方法需要专业人员在实验室操作，操作繁琐，检测费时费力；而且需要昂贵的仪器设备，如PCR仪、酶标仪等，对非专业人员而言，上述检测方法很难完成。虽然上述方法特异敏感，但无法实现现场快速检测或诊断。本发明，研究一种简便快速、实时在线检测试纸，对控制和消灭此疾病意义重大。

三、发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中检测猪病病原存在的缺点，提供一种特异、敏感、简便快速的猪副嗜血杆菌检测方法，研制出检测猪副嗜血杆菌的检测试纸条。

本发明的技术方案是：提供一种猪副嗜血杆菌的检测试纸条，该试纸条含有支撑层和吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，吸附层附着在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层和手柄端的吸水材料层，在纤维素膜层上设有检测印迹和对照印迹；金标抗体纤维层吸附有纳米级金颗粒标记的抗猪副嗜血杆菌的单克隆抗体，检测印迹用抗猪副嗜血杆菌的配对单抗印制，对照印迹用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗体；或金标抗体纤维层吸附有纳米级金颗粒标记的抗猪副嗜血杆菌的多克隆抗体，检测印迹用抗猪副嗜血杆菌的单抗制备，对照印迹用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）或抗猪IgG多抗制备。

检测印迹用抗猪副嗜血杆菌的配对单抗制备即用猪副嗜血杆菌的配对单抗溶液制备；检测印迹用抗猪副嗜血杆菌的多克隆抗体制备即为用猪副嗜血杆菌的多克隆抗体制备。

支撑层用不吸水的硬质塑胶片条或硬纸条制成；测试端样品吸附纤维层用玻璃棉制成；金标抗体纤维层用玻璃棉和金标抗体制成，金标抗体可以是单抗或多克隆抗体。

纤维素膜层用硝酸纤维素膜、或纯纤维素膜、或羧化纤维素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纤维素膜制成。

吸水材料层用吸水纸制成。

检测印迹和对照印迹为直线式、或斜线式，纤维素膜层上含有一条检测印迹和一条对照印迹，检测印迹和对照印迹的排列形式为“｜｜”、“/ /”、“＼＼”中的任一种。