[发明专利]一株乙羧氟草醚降解假单胞菌YS-03及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物高技术领域，是利用微生物的方法降解化学农药，适用于现代农业生产中绿色无公害农产品的生产与加工，具体涉及一株乙羧氟草醚降解假单胞菌YS-03及其应用。

背景技术

含氟农药是近几十年来使用的新兴农药。氟原子具有半径小、电负性大的特点，将氟原子和含氟基团（如：-CF3）引入到具有生物活性的有机化合物中，能大大提高有机氟化物的稳定性和生理活性，从而成为当今研究和开发的热点。但含氟农药大量使用导致此类农药在土壤和水体环境中的残留，可能会对生态环境和人体健康构成潜在威胁，因此含氟农药在环境中的迁移、转化和分解等环境行为正受到日益关注。

随着人们生活水平的提高和环境保护意识的增强，全社会对农药残留带来的直接危害和潜在影响亦愈来愈关注，人们迫切需要无农药残留污染的清洁的绿色农产品。但从目前我国的农业生产形式和人口状况来看，以停止农药使用降低农业产量为代价的无公害生产模式是行不通的，农药作为控制病虫害的有效手段还将继续在农业生产中发挥巨大的作用。如何能解决农业生产中的这个两难问题就成为各个学科的研究热点。实验室和实际应用研究都表明利用微生物来降解消除土壤中的农药残留“库”容量，从而降低粮食、蔬菜、茶叶等农产品中的农药残留，提高农产品的品质和经济价值是可行的。

乙羧氟草醚 (Fluoroglycofen-ethyl)，是由美国罗姆–哈斯公司开发的一种二苯醚类除草剂，具有较高脂溶性和疏水性。该除草剂为触杀型，主要用于禾谷类作物防除阔叶杂草，具有活性高、杀草谱广、毒性低的特点，是一种很有市场前景的三氟甲基二苯醚类除草剂。它通过杂草茎叶吸收后进入细胞内部，破坏细胞膜，使细胞内容物溢出，对植物组织产生物理性伤害，最终导致死亡，可用于防除小麦、大麦、花生、大豆和稻田的苗后阔叶杂草等。目前，国内外有关乙羧氟草醚在环境中降解动态方面的研究不多，而生物修复技术因微生物本身能对各类不同的有机污染物进行降解和转化而具有巨大的潜力。因此，从自然环境中筛选得到能够去除乙羧氟草醚的有效菌种具有重大的意义。

发明内容

本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，开发研制出一种新型的农药残留降解菌剂，使用本菌剂可以使乙羧氟草醚、乙氧氟草醚、三氟羧草醚等二苯醚类含氟除草剂的残留量降低90％以上。具有较广的降解谱，生产和使用成本较低。使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行病虫害防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求。

本发明提供一种消除乙羧氟草醚残留的降解菌，其菌株YS-03是一株革兰氏染色反应阴性菌，于2013年1月15日保藏于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏编号CGMCC NO.7144，经鉴定是假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。主要生物学特性为G^-，在LB固体培养基上菌落呈浅绿色，经结晶紫染色后在显微镜下菌为杆状，无芽孢，极生鞭毛，大小0.8~1.3×0.5~0.6μm；接触酶阳性；氧化酶阴性；不能水解淀粉，不能液化明胶，伏-普反应阳性，甲基红反应阴性，不产生吲哚，水解吐温-80。该菌还能以乙羧氟草醚为唯一碳源进行生长。

本发明提供了假单胞菌YS-03在乙羧氟草醚讲解中的应用。在实验室摇瓶培养条件下乙羧氟草醚的降解率达90％以上。该菌可以用发酵工业通用发酵设备进行生产。

本发明还提供了含有所述假单胞菌YS-03的菌剂。

本发明还提供了所述假单胞菌YS-03生产菌剂的方法。

所述假单胞菌YS-03生产菌剂的方法，包括：斜面种－摇瓶种－种子罐－生产罐－产品，所述产品的包装剂型为液体菌剂或固体吸附菌剂。

所述生产菌剂的方法，具体为：

1） 将乙羧氟草醚残留的假单胞菌YS-03的试管种接种于LB培养基中，振荡培养至对数期；

2） 将步骤1）培养好的菌种按10％的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，即种子液。

3） 将步骤2）所述种子液按10％的接种量接入生产罐进行发酵培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同，发酵完成后的培养液即为菌剂。

步骤1）中所述的LB培养基配方为：NaCl 10.00g/L,蛋白胨10.00g/L,酵母粉5.00g/L,pH7.0。