[发明专利]基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物拉曼性质研究的方法

权利要求书

1.一种基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物拉曼性质研究的方法，其特征在于包括大金纳米粒子和小金纳米粒子的合成，其表面的引物修饰，金纳米粒子-引物偶联物的稳定，不同长度的链状可控组装，组装产物的拉曼性质表征；

具体步骤：

（1）25nm金纳米粒子合成

采用柠檬酸三钠还原氯金酸合成25nm金纳米粒子；

（2）10nm金纳米粒子合成

采用单宁酸还原氯金酸合成10nm金纳米粒子；

（3）金纳米粒子和引物的偶联

将新合成的25nm金纳米粒子和巯基修饰的上游引物F-primer偶联，新合成的10nm金纳米粒子和巯基修饰的下游引物R-primer偶联，分别形成金纳米粒子-引物偶联物；

F-primer：5’-SH-(CH₂)₆-TGGCTGACCCTGATGAGTTCG-3’，扩增长度为50bp；

R-primer：5’-SH-(CH₂)_6--GGGCCATGATTACGCCAGTT-3’，扩增长度为50bp；

（4）金纳米粒子-引物偶联物的稳定

将金纳米粒子-引物偶联物和巯基修饰的聚乙二醇PEG₁₀₀₀反应，以稳定金纳米粒子；

（5）链状可控组装

以λDNA为模板，通过优化PCR扩增条件，将金纳米粒子-引物偶联物在PCR体系中进行不同循环数下的组装，离心浓缩，得组装产物；

（6）组装产物的TEM和拉曼性质的表征

组装产物进行TEM和拉曼性质表征。

2.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物拉曼性质研究的方法，其特征在于不同粒径金纳米粒子合成：

25nm金纳米粒子合成：将47.5mL的超纯水加入到洁净的三角烧瓶中，搅拌条件下加入2.5mL的浓度为2g/L的氯金酸，加热搅拌，达沸腾，紧接着加入0.9mL1%的柠檬酸三钠溶液，边加热边搅拌，溶液颜色从淡紫色变成红色，反应持续6-8min以使柠檬酸三钠完全沉降；溶液冷却至4℃保藏，即制得粒径为25nm的金纳米粒子；

10nm金纳米粒子合成：配制1mL1%的氯金酸于79mL的超纯水中，混合均匀即为A溶液；将4mL1%柠檬酸三钠溶液、0.1mL1%的单宁酸溶液和0.1mL浓度为25mM的碳酸钾混于15.8mL的超纯水中，即为B溶液；将A和B溶液分别加热到60℃，在高速搅拌下把B溶液迅速加到A溶液中，反应液在60℃下继续搅拌反应，然后溶液加热回流2min，形成亮红色的溶液，最终冷却至室温合成粒径在10nm的金纳米粒子。

3.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物拉曼性质研究的方法，其特征在于金纳米粒子和引物的偶联

①将步骤（2）中制备好的1mL2nM25nm金纳米粒子及1mL10nM10nm金纳米粒子分别以7000rpm及13000rpm离心10min，弃上清，分别重悬在100μL的超纯水中，4℃保藏、待用；

②25nm金纳米粒子和上游引物F-primer偶联：取①制备好的50μL25nm金纳米粒子加入50μL200nM的F-primer，混匀，室温反应12h；

③10nm金纳米粒子和下游引物R-primer偶联：取①制备好的50μL10nm金纳米粒子加入50μL1μM的R-primer，混匀，室温反应12h；

④将上述②和③步骤中反应溶液分别在7000rpm及13000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用。

4.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物拉曼性质研究的方法，其特征在于金纳米粒子-引物偶联物的稳定

将步骤（3）所得的金纳米粒子-引物偶联物中加入2μL100μM的PEG₁₀₀₀，室温反应12h，反应后的溶液在8000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用。