[发明专利]用于扩增核酸的组合物、方法和试剂盒

权利要求书

1.一种酶抑制剂，所述酶抑制剂包含核苷酸序列和至少两种不同的猝灭剂，其中所述核苷酸序列包含至少一个双链片段。

2.一种包含酶和权利要求1的酶抑制剂的复合物。

3.权利要求2的复合物，其中所述酶包括DNA聚合酶，RNA聚合酶，连接酶，解旋酶，裂解酶，或它们的组合。

4.权利要求3的复合物，其中所述酶是聚合酶并且所述酶抑制剂是聚合酶抑制剂。

5.权利要求4的复合物，所述复合物还包含NTP，核苷酸类似物，或NTP和核苷酸类似物。

6.权利要求5的复合物，其中所述聚合酶抑制剂不可通过所述聚合酶延伸。

7.权利要求4的复合物，其中所述聚合酶抑制剂的核苷酸序列包括适体。

8.权利要求1或2的酶抑制剂或复合物，其中所述酶抑制剂的核苷酸序列包含核苷酸类似物。

9.权利要求1或2的酶抑制剂或复合物，其中所述酶抑制剂的核苷酸序列包含第一区域、第二区域、第三区域和任选第四区域；并且其中所述第一区域与所述第三区域互补。

10.权利要求9的酶抑制剂或复合物，其中所述第一区域、所述第三区域或所述第一区域和第三区域包含至少一个核苷酸类似物；并且其中所述第一区域包含第一猝灭剂而所述第二区域包含第二猝灭剂，并且任选地，所述第一猝灭剂和第二猝灭剂是不同的。

11.权利要求1或2的酶抑制剂或复合物，其还包括小沟结合物。

12.权利要求8的酶抑制剂或复合物，其中所述核苷酸类似物包括脱氮-dA、脱氮-dG、ddN、PNA、LNA或它们的组合。

13.权利要求1或2的酶抑制剂或复合物，其中所述核苷酸序列包括5’-TCTGGGATA(脱氮-dA)TT(脱氮-dA)TGGTA(脱氮-dA)ATATG(Tn)C(脱氮-dA)TATTTATT(脱氮-dA)TA(脱氮-dA)TTATC-3’，并且其中所述Tn包括TT、TTT、TTTT、TTTTT或TTTTTT。

14.权利要求11的酶抑制剂或复合物，其中所述第一猝灭剂包括DABCYL、DABSYL、TAMRA、TET和ROX中的至少一种；并且所述小沟结合物还包括第二猝灭剂。

15.一种减少非特异性荧光的方法，该方法包括：

(a)在第一温度，形成包含权利要求1的酶抑制剂、酶、靶核酸、引物和核酸染料的反应组合物，其中所述酶抑制剂和所述酶缔合形成复合物，并且其中所述至少两种不同的猝灭剂抑制与所述酶抑制剂的双链片段缔合的核酸染料的荧光；

(b)将所述反应组合物加热到第二温度，以使所述复合物解离；

(c)将所述反应组合物进行至少一个扩增循环，以产生多种扩增子；和

(d)在反应组合物中检测与所述多种扩增子缔合的核酸染料的荧光，其中所述猝灭剂抑制与所述酶抑制剂的核苷酸序列的双链片段缔合的核酸染料的荧光。