[发明专利]酶法提取狗肾多肽的方法及所得到的狗肾多肽提取物

说明书

技术领域

本发明方法涉及狗肾深加工技术领域，具体涉及一种利用生物酶酶解动物药材狗肾，从而提取狗肾中多肽的方法，以及所提取得到的狗肾多肽提取物。

背景技术

狗肾(Penis et Testis Canis)，犬科动物狗Canis familiaris L.(雄性)的干燥阴茎和睾丸，四季可收，将附着的肉及油脂去净，晾干或焙干即得。别名黄狗肾、广狗肾、狗鞭、狗宝，为次常用中药，原名牡狗阴茎，“神农本草经”列为下品。狗肾性咸，大热，主含雄性激素、蛋白质、脂肪等成分，有暖肾，壮阳，益精等的功效，主要用于肾虚阳痿，遗精，腰膝痿弱无力等症。有研究显示，狗肾提取物能提高卵巢摘除大鼠雌激素活性以及促进幼鼠子宫、卵巢的发育，这与黄狗肾具有暖肾壮阳等功效相一致。

对狗肾有效成分的提取有传统的水提法、醇提法，也有研究用超临界CO₂萃取，参见CN102138936A，其中公开了一种黄狗肾提取物及其制备方法，采用醇提取+超临界CO₂萃取工艺，所得提取液有更好的抗卵巢功能早衰的作用。但此种提取方法工艺繁琐，且提取成本较高，不利于工业化生产制备。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酶法提取狗肾多肽的方法，以对狗肾多肽进行更充分提取，提高氨基酸及多肽提取效率。

本发明的另一目的在于提供一种按照所述的方法制备得到的狗肾多肽提取物，该提取物中含有多种狗肾多肽成分，且保持良好的生物活性。

一方面，本发明提供了一种酶法提取狗肾多肽的方法，其中，是采用了酶工程与传统中药提取技术的结合，对狗肾进行处理，提取其中的狗肾多肽。

根据本发明的具体实施方案，本发明提供的酶法提取狗肾多肽的方法，包括对动物药材狗肾进行酶提取和醇提取的步骤，其中：

酶提取步骤：以添加蛋白酶制剂的水溶液作为酶提取液，对绞碎后的狗肾进行浸渍提取，提取条件：30℃～55℃酶解0.5小时～6小时；

醇提取步骤：向酶解后的狗肾溶液中加入乙醇，配成30％～60％体积浓度的乙醇提取液，50℃～90℃加热回流1小时～5小时；残渣用30％～60％体积浓度的乙醇液再次50℃～90℃加热回流提取1～4小时，合并提取液。

本发明的酶法提取狗肾多肽的方法，在酶提取步骤中，加入了蛋白酶制剂，对动物药材狗肾进行深加工，使狗肾药材中的蛋白可通过酶制剂的降解，得到分子量较小的多肽类物质，为之后的制剂开发奠定基础。

根据本发明的具体实施方案，本发明的酶法提取狗肾多肽的方法中，所述蛋白酶制剂的添加量为药材重量(除特别注明外，本发明中所述药材量均是以狗肾药材干重计)的0.5％～3％。

根据本发明的具体实施方案，本发明的酶法提取狗肾多肽的方法中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶或其混合物。更优选地，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，且所述木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1∶1～2∶1。本发明要求各酶制剂的规格：蛋白酶活力不低于20万u/g。

根据本发明的具体实施方案，本发明的酶法提取狗肾多肽的方法中，所述酶提取步骤中，添加酶制剂的水溶液的量为药材量的3～4倍重量。

根据本发明的具体实施方案，本发明的酶法提取狗肾多肽的方法中，所述酶提取步骤中，优选的酶解条件为：以添加木瓜蛋白酶、胰蛋白酶或两者混合物的的水溶液作为酶提取液，对绞碎后的狗肾进行浸渍提取，充分搅拌均匀，30℃～55℃酶解0.5～6小时。

本发明的酶法提取狗肾多肽的方法中，考虑到成份的极性和温度的影响，对酶提取液进一步采用了两次乙醇加热回流的方法进行循环处理，之后过滤，得提取液。具体地，本发明在酶解后，不需进行额外的灭酶处理，即可向狗肾酶提取液中加入乙醇配制30％～60％的乙醇提取液，在醇提加热回流时即会对酶产生灭活。

根据本发明的具体实施方案，本发明的酶法提取狗肾多肽的方法中，所述醇提取步骤中，两次乙醇提取液的量均可分别为药材量的5～10倍。两次醇提的提取液量可以相同或不同。两次醇提的提取液的浓度可以相同或不同。两次醇提的温度优选为基本相同。

根据本发明的具体实施方案，本发明的酶法提取狗肾多肽的方法还包括：

对醇提取后得到的醇提取液进行浓缩干燥，得到狗肾多肽浓缩提取液或狗肾多肽提取浸膏。浓缩过程中回收乙醇，重复利用，以进一步降低成本。

根据本发明的具体实施方案，本发明的酶法提取狗肾多肽的方法中，所述对醇提取液进行浓缩干燥的操作条件是：50℃～90℃旋蒸法减压浓缩，90℃以下真空干燥。